李艳
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省农科院院长基金广东省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪葡萄球菌EXHC、SHETA基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测被引量：1
- 2014年
- 为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株（GenBank登录号：AF515455）及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株（GenBank登录号：JF755400）的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株（GenBank登录号：AB036768）的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。
- 张乐宜李艳蔡汝健蒋智勇刘燕玲宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌
- 猪链球菌ssnA基因缺失突变菌株的构建及毒力分析被引量：1
- 2017年
- 分泌型核酸酶基因ssnA是近年来研究发现的一种脱氧核糖核酸酶,被认为是一种猪链球菌2型(SS2)潜在的毒力因子。为了分析ssnA基因对于SS2毒力的影响,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组构建了SS2流行毒力株GD01的ssnA基因缺失突变菌株,并通过比较分析了野生菌株与缺失突变菌株的生长特性及溶血活性等生物学特性。结果显示,GD01株与ΔssnA突变株的生长速度及溶血活性没有明显差异;ssnA基因缺失后SS2对Hep-2细胞的黏附及入侵能力则明显下降。小鼠毒力试验结果显示,ssnA基因缺失突变菌株对于CD1小鼠LD50是6.17×108cfu,而SS2野生菌株的LD50是4.42×107cfu,缺失突变株的LD50约是野生株的14倍,表明ssnA的缺失对SS2毒力产生明显影响,提示ssnA基因在其致病过程中具有重要作用,其具体作用机制需进一步分析。
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- 关键词：猪链球菌2型基因缺失毒力
- 1株猪葡萄球菌强毒株的分离鉴定及致病性试验被引量：13
- 2015年
- 为确定广东省增城某猪场产房仔猪暴发渗出性皮炎的致病菌,从病猪心脏、肺脏、病变皮肤分离并纯化细菌,经形态学观察,镜检,生化特性及gap基因的序列分析,确定为猪葡萄球菌,命名为ZC-4株。药敏试验结果显示该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、新生霉素高度敏感,对头孢噻肟、万古霉素、庆大霉素中度敏感,对青霉素、阿莫西林、磺胺类药物、链霉素、恩诺沙星等均耐药。对分离株毒素基因进行检测,结果显示,分离株携带ExhA毒素基因,测序结果表明,其编码区全长为822bp,编码274个氨基酸;氨基酸序列与丹麦分离株ExhA基因(AF515453)的同源性最高,为99.6%;遗传进化分析显示,分离株所携带的毒素基因与参考菌株猪葡萄球菌ExhA毒素基因聚类紧密,位于一个小的分支内。分离株致病性试验结果显示,分离株接种25日龄健康断奶仔猪后24h,病猪耳根、四肢内侧、背部、腹部、臀部、尾根等部位出现蜕皮并露出有液体渗出的鲜红创面,继而皮肤形成一层厚厚的结痂,说明该菌株具有较强的致病性。本试验为猪葡萄球菌疫苗的研制及致病机制研究提供了理论依据。
- 李艳张乐宜宋长绪
- 关键词：猪渗出性皮炎猪葡萄球菌
- 猪源绿色气球菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列测定与遗传进化分析被引量：7
- 2014年
- 为研究引起广东部分地区猪场仔猪发生急性死亡的致病菌及其系统发育地位,本研究从广东英德、惠州龙门、翁源、汕头等地区猪场急性死亡病仔猪中分离到6株呈α溶血的细菌。通过细菌形态学观察、生化特性鉴定、药敏试验、致病性试验以及16S rRNA基因的序列分析,确定为猪源绿色气球菌,分别命名为HD、WY、ZQ、LM、YD和ST。动物感染试验表明:6株分离菌株均具有不同程度的致病性;药敏结果显示:6株分离株均对头孢曲松、头孢唑啉、恩诺沙星、阿莫西林高度敏感,对新生霉素、利福平、阿米卡星、庆大霉素、多粘菌素B中度敏感,对其他抗生素均耐药;同源性及遗传进化分析结果显示:6株分离株与12株国内外参考菌株核苷酸同源性在93%以上,其中与澳大利亚分离自犬的15MS株同源性最高,为98.1%,与广西分离自猪的GXBL-1株同源性最低,为83.6%;6株分离株与广东分离株和澳大利亚分离株亲缘关系最近,暗示进化不存在明显的地域相关性。本研究确定了广东部分地区引起规模化猪场仔猪发生急性死亡的病原菌,为该菌引起的疾病的防治提供了依据。
- 张乐宜李艳蔡汝健刘燕玲蒋智勇宋长绪
- 关键词：绿色气球菌RRNA遗传进化分析
- 玉米大垄覆膜栽培技术的研究初报被引量：3
- 1998年
- 大垄玉米覆膜主要有两种方式：一种是将三条６５ｃｍ小垄改成两条９７５ｃｍ大垄，每条大垄种植２行玉米，小行距３０ｃｍ；另一种是将两条６５ｃｍ小垄改成一条垄距为１３０ｃｍ超大垄，每条大垄种植４行（大垄上开两个播种沟，沟间距离４０ｃｍ，沟宽２０ｃｍ，沟内双...
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- 关键词：玉米大垄覆膜栽培技术正交设计
- 猪葡萄球菌脱落毒素ExhC基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2014年
- 为研究猪葡萄球菌表皮脱毒素Exh C基因的分子特征及其原核表达产物的免疫学活性,利用PCR技术从猪葡萄球菌广东增城分离株(GDZC株)扩增出表皮脱落毒素Exh C基因,测序与序列比较分析显示,其编码区全长为837bp,编码279个氨基酸,与国内外猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌表皮脱落毒素Exh C基因的核苷酸同源性、氨基酸同源性均为100%。将Exh C基因克隆于pET-28a(+)表达载体中,经测序正确后,重组质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和Western blot分析。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量大小约为32ku,与预期大小一致。Western blot分析表明,Exh C重组蛋白能与猪葡萄球菌GDZC株的阳性血清发生特异性反应,说明表达的GDZC株Exh C重组蛋白具有良好的免疫学活性。
- 张乐宜吴坚文蔡汝健李艳蒋智勇刘燕玲宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌C基因原核表达
