孙永科
- 作品数：60 被引量：216H指数：9
- 供职机构：云南农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金高层次科技人才培引工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用被引量：1
- 2011年
- 猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应条件优化后,建立了CSFV和PRRSV一步法RT-PCR的检测方法。对云南部分地区猪高热病病料检测的结果表明,本方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,为云南猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的快速检测提供了重要的技术支持。
- 李圣郑欢莉李红炳孔令富张晓敏钏有科孙永科杨玉艾
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR
- 非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0/E2基因序列分析被引量：5
- 2009年
- 从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106TCID50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200bp和700bp的E2和E0蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E0和E2基因片段为697bp和1 173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性仅为95.4%和96.6%、82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为94.1%和95.2%、83.3%和85.4%。动物试验结果表明,分离的2株猪瘟野毒不能引起典型的猪瘟症状,但是能持续带毒。
- 孙永科杨玉艾孔令富毕保良冷春永冷思明
- 关键词：猪瘟病毒
- 新发人畜共患传染病的防控策略
- 2011年
- 当今传染病总的形势是：经典的微生物引起的传染病尚未得到很好的控制，一些过去已经基本控制的病原性微生物却重新抬头，同时新的病原性微生物不断被发现，新的传染病以年均1种的速度不断发生。
- 杨玉艾江波孙永科
- 关键词：人畜共患传染病防控策略微生物病原性
- 非典型性猪瘟病毒云南株/石门株嵌合病毒的构建和拯救被引量：2
- 2012年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)云南株(YN株)突变位点在致非典型性猪瘟中的作用,本研究在CSFV石门株全长感染性克隆的基础上,利用分子克隆技术,将CSFV YN株的1 510位～1 532位、2 471位～2 658位、3 152位～3 176位和11 785位～11 816位突变位点基因序列替换CSFV石门株的相应基因序列,构建出嵌合的CSFV感染性克隆质粒pAC-SM-YN。全基因测序鉴定后,体外转录得到病毒RNA,经脂质体转染PK-15细胞方法拯救出了嵌合病毒vSM-YN。经直接荧光染色、对突变位点RT-PCR以及ELISA检测表明拯救嵌合病毒vSM-YN传代稳定。本研究为研究CSFV结构蛋白、病毒致病机理、新型疫苗,尤其是非典型猪瘟的致病机理奠定了基础。
- 孙永科孔令富张晓敏郑欢莉林明星陈海婷杨玉艾
- 关键词：猪瘟感染性克隆嵌合病毒
- 表达传染性支气管炎病毒S1基因重组禽痘病毒的构建
- 将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681-IBVS1。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与...
- 田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒
- 文献传递
- 表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建被引量：5
- 2006年
- 将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明,获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传,间接免疫荧光和Westernblot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBVS1糖蛋白。
- 田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒S1基因
- 表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态被引量：1
- 2006年
- 采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的变化动态进行监测。重组疫苗和禽痘疫苗免疫之后,CD8+和TCRγδ+的细胞数先升高后回落;在NDV强毒攻击之后,ND疫苗免疫组的TCRγδ+数量升高,rFPV-gB-F免疫组的三种细胞数量在第1周都下降,随后升高;ILT疫苗在免疫后的第1周,CD4+细胞数量下降。结果提示rFPV-gB-F可以诱发相应的细胞免疫应答,但是有关传染性喉气管炎病毒导致的细胞免疫需要进一步的研究。
- 智海东王云峰孙永科张晶王玫彭金美刘永刚童光志
- 关键词：传染性喉气管炎新城疫重组禽痘病毒外周血T淋巴细胞
- 表达鸡γ-干扰素和传染性支气管病毒S1基因的重组鸡痘病毒疫苗对鸡外周血T淋巴细胞动态分布影响的研究被引量：14
- 2006年
- 机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+三种亚类T淋巴细胞的数量的变化,初步探讨了干扰素对鸡外周血中T淋巴细胞亚类动态分布的影响。结果表明,含有干扰素基因的重组鸡痘病毒能显著增高机体特异性的CD8+和TCRδγ+T淋巴细胞水平,CD4+T淋巴细胞比例则要低于其他的疫苗免疫组。
- 孙永科田占成王云峰刘胜旺童光志智海东王玫
- 关键词：T淋巴细胞重组鸡痘病毒
- 表达猪瘟病毒石门株E0/E2基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究
- 孙永科
- 关键词：猪瘟病毒重组腺病毒E0基因E2基因
- 文献传递
- 猪瘟病毒E0和E2蛋白融合表达的重组腺病毒构建及免疫保护性研究被引量：10
- 2010年
- 为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒。用KpnⅠ和NotⅠ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2融合基因,定向亚克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,采用"两步转化法"在细菌内同源重组,构建携带E0-E2基因的重组腺病毒转移载体质粒pAdEasy-E0-E2,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚胎肾细胞(HEK293),成功包装出重组腺病毒(rAd-E0-E2),PCR和western blot检测表明,E0-E2基因已重组于腺病毒基因组中并获得表达。将rAd-E0-E2接种于小鼠和猪,并通过ELISA进行抗体检测。另外,将rAd-E0-E2经肌肉2次(间隔7d)免疫接种6周龄～7周龄猪,3周后用103TCID50CSFV石门株攻毒。结果表明,rAd-E0-E2免疫组6/7头存活,各组织器官带毒时间不超过10d,而非重组腺病毒rAd-CMV免疫组和空白对照组全部死亡,各组织器官均能分离到CSFV。结果提示,rAd-E0-E2能使免疫猪抵抗CSFV强毒攻击,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗提供了实验依据。
- 杨玉艾初晓辉毕保良杨亮宇吴翱邱春富孙永科
- 关键词：重组腺病毒猪瘟病毒
