张国恩
- 作品数：13 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 隐孢子虫rP23间接ELISA诊断方法及体内瞬时转染系统的构建
- 隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)感染动物和人引起的一种寄生虫病,以自限性水样腹泻为主要症状。隐孢子虫能感染170多种动物,其中哺乳动物至少有79种。隐...
- 张国恩
- 关键词：隐孢子虫间接ELISA细胞培养
- 隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 将隐孢子虫鼠基因型（Cryptosporidium mouse genotype）P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中，并用大肠杆菌BL21（DE3）为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原，建立隐孢子虫间接E...
- 张国恩米荣升苏庆美黄燕周鹏胡义彬秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：隐孢子虫原核表达间接ELISA检测试剂盒
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及其抗血清的制备
- 以微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR（SOE PCR）将该三段基因片段串联在一起,各基因片...
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 文献传递
- 隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。
- 苏庆美何生虎米荣升张国恩黄燕周鹏秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：真核表达质粒HELA细胞
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
- 2012年
- 以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
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- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 不同DNA提取方法对隐孢子虫卵囊PCR检测的影响被引量：5
- 2011年
- 为了提高隐孢子虫PCR检测的敏感性和效率,采用10种基因组DNA提取方法,对隐孢子虫卵囊DNA进行提取,对提取的DNA进行nested PCR扩增。经过3次重复试验,结果显示,Chelex 100法、FTA试纸法和Wizard DNAClean-Up System试剂盒法敏感性最高,能够稳定地扩增出1×102个卵囊提取的DNA,适合隐孢子虫病分子流行病学调查时大量样品DNA的提取。
- 陈兆国米荣升周鹏黄燕张国恩苏庆美秦培兰呼高伟林矫矫
- 关键词：隐孢子虫DNA
- 微小隐孢子虫感染HCT-8细胞模型的建立及不同阶段虫体形态观察
- 为建立微小隐孢子虫体外感染模型，并对其在细胞内的不同发育阶段虫体形态进行观察，利用人回盲肠癌(HCT-8)细胞作为感染细胞，采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养，观察细胞的生长状况；在培养细胞中加入1×...
- 张国恩米荣升周鹏黄燕秦培兰呼高伟曹薇陈兆国
- 微小隐孢子虫感染HCT-8细胞模型的建立及不同阶段虫体形态观察
- 张国恩米荣升周鹏黄燕秦培兰呼高伟曹薇陈兆国
- 隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 将隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原,建立隐孢子虫间接ELISA检测方法,观察其敏感性、特异性和重复性,并对临床血清样品进行检测。结果隐孢子虫鼠基因型P23基因在大肠杆菌中获得了高效表达,Western blot检测显示rP23能被隐孢子虫感染兔血清识别。以纯化rP23为诊断抗原,成功地建立了检测兔隐孢子虫病的间接ELISA技术。对23份临床血清检测结果显示,该方法检出率高于Sheather's蔗糖漂浮法、套式PCR法。本研究结果为研制兔隐孢子虫病诊断试剂盒打下了基础。
- 张国恩米荣升苏庆美黄燕周鹏胡义彬秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：原核表达间接ELISA
- 微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析被引量：4
- 2012年
- 应用多个抗原表位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞表位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm。将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列。Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础。
- 秦培兰李艳米荣升呼高伟黄燕周鹏张国恩苏庆美曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫抗原表位重叠延伸PCR抗原性
