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共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性被引量：4: 2008年; 【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。; 李炯刘艳红刘湘涛尚佑军刘俊林安芳兰殷宏; 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳蛋白

逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达被引量：11: 2009年; 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 李炯刘艳红安芳兰刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏; 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞

口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建被引量：8: 2006年; 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。; 刘艳红李炯刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏; 关键词：A型口蹄疫病毒衣壳蛋白基因蛋白酶基因

口蹄疫病毒空衣壳蛋白的表达加工及其免疫原性研究: 口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病,在世界上许多国家和地区都有该病的流行。疫苗接种是预防口蹄疫的有效手段。近年来,用口蹄疫空衣壳蛋白作为疫苗候选抗原成为研究的热点。本实验首先构建了C型口蹄疫病毒P1序列不同长度缺...; 李炯; 关键词：口蹄疫病毒逆转录病毒载体免疫原性; 文献传递

一种A型口蹄疫亚单位疫苗的制备方法: 本发明涉及一种制备用于预防因A型口蹄疫病毒引起的动物疾病的亚单位疫苗，以及这种方法制备的疫苗。本发明疫苗的制备方法是：设计引物与模板并用聚合酶链式反应分别制备出口蹄疫病毒的P12X基因和3C基因，再将所得到的P12X基因...; 刘艳红刘湘涛刘俊林李炯安芳兰田宏尚佑军; 文献传递

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李炯