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应用牙釉质基因鉴定绒山羊早期胚胎的性别被引量：1: 2012年; 采用酚-氯仿法和煮沸法从南疆绒山羊血液和早期胚胎中提取基因组DNA,分别以雄羊和雌羊的血液基因组DNA和早期胚胎基因组DNA(约20～30胚胎细胞)为模板,以AMEL引物进行PCR扩增和电泳分析.结果表明:绒山羊5ng量和10pg量血液基因组DNA经扩增后雌性只得到1条非特异性带,雄性得到1条非特异性带和1条特异性带;超微量血液基因组DNA样本(10pg)经巢式扩增和电泳分析能够鉴定绒山羊性别;32枚绒山羊胚胎鉴定结果,雄雌性别比17/15;移植胚胎产羔雄雌比15/14.采用牙釉质基因(AMEL),经巢式扩增和电泳分析能够鉴定绒山羊性别,并对胚胎无损伤;南疆绒山羊早期胚胎性别鉴定结果与胚胎移植后产羔性别结果对比,雌雄性别比率差异不显著(P>0.05).; 王惠娥张志国高庆华唐纪伟沈波; 关键词：南疆绒山羊胚胎性别鉴定巢式PCR

奶牛精子原位杂交蛋白酶K浓度的优化被引量：1: 2011年; [目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效去除精子蛋白质,又能保持精子的基本形态。[结论]精子原位杂交的最佳蛋白酶K浓度是30μg/ml。; 沈波孙献莹孟浩高庆华; 关键词：精子原位杂交奶牛

奶牛精子RNA提取被引量：5: 2011年; 优选3头公牛细管冻精,采用上游法获得纯化精子,以含体细胞污染的精子作对照,应用离心层析柱方法和Trizol一步法相结合提取总RNA,紫外分光光度计检测总RNA的D260/280值和产量,并对总RNA进行RT-PCR和凝胶电泳。结果显示,纯化的牛精子中不含体细胞,奶牛细管精液总RNA在2 h内完成提取,D260/280值为1.80,大于200 bp的总RNA产量为0.92μg/107个精子,精子总RNA进行RT-PCR,电泳后可得到清晰的SRY、LEP和RPS23基因3条带,不含18S rRNA基因条带。结果表明,离心层析柱法和Trizol一步法相结合可获得高质量的奶牛精子总RNA,且纯度和完整度高,可满足分子生物学研究的要求。; 王惠娥孙献莹高庆华韩春梅沈波武延风; 关键词：奶牛精子总RNA RT-PCR

异性孪生不育研究进展被引量：1: 2012年; 本文综述了当前的异性孪生不育生物学、诊断和非牛物种发生状况的研究。异性孪生胎儿胎盘间血管发生联系导致XX/XY间性嵌合体,而雌性胎儿生殖器发生雄性化导致不孕。异性孪生不育是最常见的牛间性形式,偶尔其他物种。建立早期诊断异性孪生不育的新的诊断方法的基础上检测Y染色体DNA片段的聚合酶链反应较常规核型分析和临床检查显示灵敏度和效率的改善,异性孪生不育检测有较大的经济重要性。新的异性孪生不育主要在异性孪生嵌合体形成机理、缪勒氏管抑制物(MIS)抗癌应用、移植免疫学和致突变致畸形研究领域。; 宫昌海马桢韩春梅艾布什胡晓龙沈波孙献莹武延风高庆华; 关键词：不育

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化被引量：1: 2011年; 【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积。【结果】40 mmol/L DTT处理45 min精子头部面积为(52.32±4.68)μm2,浓度<40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间<45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68)μm2(P<0.01);浓度>40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P>0.05),但精子形态不完整。【结论】40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合。; 孙献莹孟浩骆新荣沈波高庆华; 关键词：精子原位杂交 DTT 解聚

增茸素对塔里木马鹿茸形态组织的影响被引量：2: 2011年; 塔里木马鹿鹿茸组织的形态学是研究鹿茸生长发育机制的基础。本研究以增茸素处理和自然生长的生长期为30和60d的塔里木马鹿二茬鲜茸为材料,采用常规石蜡切片和HE染色等方法,对其茸皮层、未分化的间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层进行组织形态学研究。结果显示:自然生长60d的鲜茸茸皮组织切片中除了静脉数(8.56±2.66个.mm-2)外,动脉数(9.14±2.32个.mm-2)、毛囊数(15.6±6.45个.mm-2)、神经数(16.44±5.67个.mm-2)均分别高于30d的(分别为2.53±1.17、6.67±2.99、3.62±2.32个.mm-2),其中动脉和神经生长变化差异显著(P<0.05)。其它组织层附属器官生长变化无显著性差异。用增茸素处理后,茸皮仍有相类似的生长变化,神经生长变化差异仍显著(P<0.05);生长60d间充质细胞层组织切片中动脉数(3.21±1.08个.mm-2)显著高于30d的(2.47±1.17个.mm-2)(P<0.05),而生长30d的成软骨细胞层中的动脉数(10.17±2.87个.mm-2)高于60d的(8.27±2.33个.mm-2)(P<0.05)。增茸素处理组30d茸皮组织切片中的动脉数(8.74±2.90个.mm-2)和神经数(8.62±2.18个.mm-2)显著地高于自然生长组30d的(2.53±1.17、3.62±2.32个.mm-2)(P<0.05),因此增茸素对鹿茸早期生长的影响较大。马鹿茸从生长30d到60d,各组织层的变化以茸皮层最明显,以间充质细胞层的生长变化最小。; 韩春梅廖秋萍杨可沈波高庆华; 关键词：塔里木马鹿鹿茸组织形态学

奶牛精子SRY基因原位杂交检测方法的建立被引量：1: 2012年; Sry基因是Y染色体性别决定基因,采用primer premier 6对SRY基因序列设计引物,以公牛基因组DNA为模板扩增,高效DNA地高辛标记和检测试剂盒制备探针,对X精子(Y精子纯度7%)、Y精子(Y精子纯度93%)和常规精子(Y精子纯度50%)DTT去凝集、蛋白酶K去除鱼精蛋白,杂交。结果表明:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部成蓝色,边界清楚,X精子4.67%(n=600)有荧光信号,Y精子86.33%(n=600)有荧光信号,常规精子46.17%有荧光信号。实验证明了所选取Sry基因序列为Y精子携带,建立了精子原位杂交方法。; 陈荣沈波高庆华; 关键词：精子荧光原位杂交 SRY基因奶牛

牙釉质基因鉴定山羊性别的研究被引量：2: 2011年; 根据牙釉质(amelogenin,AMEL)同源基因在山羊X、Y染色体上存在不同程度碱基缺失的特点,设计1对引物,对山羊血液基因组DNA混合样进行PCR扩增,将PCR产物纯化、克隆并测序;然后对46个山羊血液DNA样本(♀:22个,♂:24个)进行性别鉴定。结果显示,雌性山羊样品经扩增只产生一条非特异性条带,雄性山羊样品产生一条非特异性条带和一条特异性条带;非特异性片段长度为349 bp,特异性片段为289 bp;46个山羊血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雌性准确率为100%(22/22),雄性准确率为100%(24/24)。; 唐纪伟张志国高庆华沈波武延风; 关键词：山羊 PCR 性别鉴定

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沈波

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