王勇
- 作品数：35 被引量：154H指数：7
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 利用合成调控RNA技术提高大肠杆菌异源合成红霉素前体6-脱氧红霉内酯B产量被引量：1
- 2015年
- 红霉素为代表的聚酮类化合物已经成功的在大肠杆菌中实现了异源合成,但其产量仍然较低（仅-10 mg/L）。本研究基于大肠杆菌全基因组代谢模型iAF1260,利用通量平衡分析预测了红霉素母核6-脱氧红霉内酯（6-Deoxyerythronolide B,6-d EB）生物合成的关键靶点,通过合成调控RNA技术（Synthetic small regulatory RNAs,sRNAs）对预测的靶点进行验证。结果表明,以弱化lsrC（编码LsrABC转运蛋白）和ack A（编码乙酸激酶蛋白）为代表的关键靶点改造可以显著提高6-d EB异源合成,提高幅度可达48.7%。通过弱化靶点的组合,进一步改善了6-d EB的异源合成,产量最终可达22.8 mg/L,比出发菌株产量提高59.9%。本研究发现和确认了6个有效的调控靶点,最终成功地改善了6-d EB在大肠杆菌中的异源合成。研究表明,通量分布比较分析结合sRNAs技术是一种有效的方法提高6-d EB异源合成,也为改善其他代谢产物的异源合成提供了可供借鉴的研究思路。
- 宋书杰熊智强王勇
- 关键词：大肠杆菌
- 黄海海域沉积物和庐山土壤样品中放线菌的分离、活性及生物多样性研究被引量：2
- 2015年
- 本研究采用均匀实验设计优化预处理条件来分离黄海海泥和庐山土壤样品中的放线菌。通过均匀实验得到最优的预处理条件为湿热50℃处理20 min,不进行超声处理以及添加苯酚。经过形态排重后,从海泥和庐山样品中分离得到86株和11株不同表型的放线菌。通过进一步的分子生物学鉴定,海泥中的86株放线菌分别属于3个不同的属,而庐山样品的11株分别属于4个不同的属。对这97株放线菌进行抗菌实验发现,18.5%的菌株对大肠杆菌有抑菌活性,7.2%的菌株对枯草芽孢杆菌有抑菌活性,但对酿酒酵母都无抑菌活性。
- 王燕萍熊智强杨靖亚王勇
- 关键词：放线菌海泥
- 海洋细菌中活性化合物的筛选策略(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的从700多株海洋沉积物分离得到的细菌中筛选安莎类抗生素和6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的次级代谢产物产生菌。方法以3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因和dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因为靶标,分别进行安莎类抗生素和6DOH糖基化修饰的次级代谢产物产生菌的分子筛选。对AHBA合酶及dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性的菌株发酵液及提取物进行抗菌、抗肿瘤、抗病毒活性分析。采用利福霉素抗性及氢氧化钠显色初步鉴定安莎类化合物;采用α-萘酚硫酸显色初步鉴定6DOH糖基化修饰的化合物。利用16S rRNA序列对部分阳性菌株进行系统发育分析。结果共获得39株AHBA合酶基因阳性和10株dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株。阳性菌株中,78%具有不同程度的生物活性。化学初步鉴定结果表明:49%的AHBA合酶基因阳性菌株产生安莎类化合物;50%的dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株产生6DOH糖基化修饰的化合物。系统发育分析表明,大多数阳性菌株属于放线菌中的链霉菌属。结论基因探针筛选可作为一种合理、有效的方法从海洋细菌中发现活性代谢产物。
- 陈菲菲林灵王以光周红霞陶佩珍赫卫清王勇
- 关键词：海洋细菌生物活性
- 阿维链霉菌中一个双组分调控系统SAV931／932功能初探被引量：1
- 2015年
- 双组分调控系统是链霉菌次级代谢产物生物合成调控中的一种重要调控机制。基于生物信息学分析,位于阿维菌素生物合成基因簇上游的双组分系统SAV931/932可能对阿维菌素合成起调控作用。敲除SAV931/932导致阿维菌素的产量提高25%以上,且菌体在发酵前期生长加快。RT-PCR显示阿维菌素合成结构基因aveA1和aveA3及调控基因aveR的转录水平均上调,说明此双组分系统在一定程度上抑制了阿维菌素的生物合成。研究表明,双组分调控系统SAV931/932可能对阿维菌素合成起负调控作用,这为研究阿维链霉菌次级代谢调控以及改善阿维菌素生物合成提供了借鉴。
- 孟令卓王勇储炬
- 关键词：阿维菌素阿维链霉菌生物合成次级代谢
- 反相高效液相色谱法检测红霉素发酵过程中S-腺苷甲硫氨酸被引量：1
- 2005年
- 建立用反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测红霉素发酵液中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的方法,观察其在发酵过程中的变化。样品经离心、超声等处理,进行RP-HPLC分析,梯度洗脱。实验结果说明,该方法可以使SAM与发酵液中其它复杂组分得到较好的分离。红霉素发酵过程中SAM量随时间呈曲线变化,高峰值出现在96h左右。
- 李京艳王勇王以光
- 关键词：反相高效液相色谱S-腺苷甲硫氨酸发酵液
- CYP725A4分子序列分析与结构建模
- 2011年
- CYP725A4在大肠杆菌等原核宿主中难以实现高效功能表达,是制约紫杉醇异源合成的瓶颈之一.文中利用生物信息学方法对该酶分子的序列进行疏水性和跨膜区分析,构建了其分子进化树,在此基础上用同源建模方法构建了其天然态以及切除N端跨膜区后的三级结构,并对CYP725A4实现功能表达所必需的辅助还原酶也进行了天然态和切除N端跨膜区后的三级结构建模.所构建的结构模型经PROCHECK验证具有较好的可靠性.
- 蒙海林汪建峰王勇张嗣良王小宁
- 关键词：生物信息学细胞色素P450酶
- 3种药用植物内生真菌的多样性分析及产生物碱菌株的筛选被引量：3
- 2013年
- 目的探究药用植物蛇足石杉、曼地亚红豆杉和南方红豆杉内生真菌的多样性,以及从中筛选产生物碱的内生真菌。方法用传统的表面灭菌和组织剪切法处理植物样品,通过加有抗细菌抗生素的真菌培养基分离和富集植物内生真菌。根据内生真菌的表型特征和ITS序列,对其进行分类和多样性分析,并用Neighbour-Joining的方法构建系统进化树。利用Dragendorff试验检测各内生真菌的发酵液,筛选具有产生物碱潜力的菌株。结果从3种植物中共分离到764株内生真菌,挑选出具有代表性表型特征的菌株83株,对ITS序列进行比对和多样性分析表明,这些菌株分布于子囊菌门(Ascomycota)的3个纲、18个属。最后,采用Dragendorff试验从这83株真菌中筛选出青霉菌属(Penicillium)B14菌株具有产生物碱的潜力。讨论三种药用植物含有丰富多样的内生真菌分布。采用Dragendorff试验检测发酵液中的生物碱,该方法快速简便,能有效提高筛选速率,可应用于产生物碱微生物的高通量筛选。
- 杨迎迎熊智强王勇
- 关键词：药用植物内生真菌多样性生物碱
- 海洋微生物来源的天然产物开发研究进展被引量：19
- 2011年
- 综述了近年来海洋微生物来源天然产物研究的新进展,总结了该类天然产物的开发策略.通过对样品采用不同的预处理方式、不同的分离培养基以及新的培养方法,讨论如何获得海洋来源的特有微生物和增加海洋来源微生物类群的多样性.阐述了在海洋微生物天然产物的开发过程中,采用宏基因组技术及基因组测序等手段,来发现难培养或不可培养微生物中的天然产物以及处于"沉默"状态的天然产物.最后介绍了异源生物合成、组合生物合成以及核糖体工程等技术在海洋微生物天然产物开发和改造中的应用,并举例论述了海洋微生物天然产物的开发.
- 陈菲菲王勇王以光赫卫清
- 关键词：海洋微生物基因组测序组合生物合成
- 复杂天然产物合成人工生物系统的设计与构建被引量：1
- 2013年
- 天然产物是人类疾病预防和治疗药物的最重要来源。合成生物学技术的蓬勃发展为天然产物的开发注入了全新的活力。文中重点介绍了如何利用合成生物技术进行复杂天然产物合成人工生物系统的设计与构建,包括与此相关的生物元件理性设计、生物元件挖掘、途径装配与集成,模块的组装与系统的适配等内容。
- 汪建峰蒙海林熊智强王勇
- 关键词：合成生物学
- 一株真菌所产环缩酚酸肽类化合物的分离和鉴定
- 2014年
- 对一株真菌ZME及其所产的次级代谢产物进行分离鉴定。通过形态观察和ITS测序对真菌ZME进行菌株鉴定,并对其发酵液上清液和菌丝体分别用乙酸乙酯和甲醇萃取;萃取后的有机试剂粗提物经硅胶柱层析和半制备HPLC分离纯化;纯化后的各组分利用光谱分析进行结构解析。结果表明,真菌ZME初步判断属于Beauveria felina。对这株真菌次级代谢物结构解析,共鉴定5个化合物Isaridin B、Isaridin A、Roseocardin、Roseotoxin B和Destruxin B,这5个化合物均为环缩酚酸肽类化合物,其中Roseocardin具有抗细菌活性。
- 张明娥熊智强刘巧霞杨迎迎王勇
