王杰
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 顺铂-马脾脱铁铁蛋白(CDDP-HSF)纳米粒的制备和表征被引量：1
- 2015年
- 为了提高顺铂(Cisplatin,CDDP)的靶向给药并达到降低其毒副作用的目的,该研究选用了具备蛋白质药物载体特征的马脾脱铁铁蛋白(Horse spleen apoferritin,HSF)作为CDDP的载体制备纳米粒。该研究通过检测不同p H值条件下HSF的荧光发射光谱得到HSF蛋白壳解聚的最佳p H值,利用该最佳p H值条件制备CDDPHSF纳米粒,并测定纳米粒的载药量、粒径、Zeta电位,及运用紫外可见光分光光度计、圆二色谱仪、透射电子显微镜对CDDP-HSF纳米粒进行初步结构表征。结果显示:HSF蛋白壳解聚的最佳p H值为13,运用该p H值将CDDP成功装载入HSF制备成为CDDP-HSF纳米粒,每个HSF能够包裹39个CDDP,载药量为2.4%;载药前HSF平均粒径为11.44 nm,Zeta电位为(-7.27±0.12)m V;载药后CDDP-HSF的平均粒径为20.04 nm,Zeta电位为(-9.36±0.20)m V。载药后HSF的共轭结构基本未改变仅二级结构有轻微差异,形状仍为均一的球形。据此本文利用马脾脱铁铁蛋白成功装载了CDDP制备成纳米粒,为HSF做药物载体的研究奠定了一定基础。
- 邹文燕王杰黄凯宗吉丽娜华子春
- 关键词：顺铂纳米粒
- 分子动力学模拟探讨Annexin A5的N-末端对其结构的影响被引量：2
- 2017年
- 研究ANX A5的N-末端存在与否对其核心区域结构以及四级结构的影响。ANX家族蛋白的显著特征是含有高度保守的C-端核心序列以及多变的N-末端结构,核心序列由4个重复的同源序列构成,具有明显的同源性,而N-末端的序列及长度在进化过程中表现出很大的多样性。为了研究N-末端对ANX蛋白的意义,文章以ANX A5为例,采用分子动力学模拟的手段分别对ANX A5单体和三聚体进行了模拟,研究N-末端对ANX A5的核心区域结构以及四级结构的影响。模拟结果显示,N-末端存在与否并不影响ANX A5单体/亚基的结构,对钙离子的结合也没有大的影响;但是N-末端存在与否对ANX A5核心序列四级结构造成了很大的影响,三聚体有加速分散的趋势,从而猜测N-末端对ANX A5的亚基之间聚合有重要作用。综上可得,N-末端存在与否不会对其核心区域的结构稳定以及与Ca^(2+)的结合造成大的影响,但是对于ANX A5三聚体结构的形成是必不可少的。
- 司孝磊王杰李家璜华子春
- 关键词：膜联蛋白A5N-末端分子动力学
- Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
- 2017年
- 膜联蛋白(annexin)是一类进化保守的多基因家族蛋白,可与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,由于PS与许多重要疾病密切相关,具有作为药物发现新靶点的潜力,使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景。Annexin A4(以下称A4)是膜联蛋白家族成员之一,参与多项细胞功能,如胞吐作用和凝血反应,所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关。目前对A4的功能尚不完全了解,获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础。为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高,且较为复杂等问题,本文通过原核系统重组表达A4,以获取大量可溶性蛋白,探究其与PS的结合能力,为后续研究奠定基础。利用分子生物学的手段构建融合表达质粒p ET28a-annexin A4-EGFP,大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP(以下称A4-EGFP)融合蛋白的纯化方法,同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力。通过亲和层析纯化获得纯度为80%的A4-EGFP;而选用膜吸附纯化方式,最终获得了纯度达90%的蛋白。流式细胞仪检测结果显示:A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞,其与PS亲和力为79.58±11.68nmol·L^(-1),与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级。本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达,建立了简易、高效的分离纯化方法,获得了产率高达75.2 mg·L^(-1)的A4-EGFP,为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础。
- 刘婧王杰华子春
- 关键词：原核表达凋亡检测
