- 人乳头瘤病毒16型E2蛋白真核载体的构建与表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2蛋白真核载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E2基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+),双酶切及测序鉴定。将质粒pcDNA3.1(+)与pcDNA3.1(+)/HPV16 E2分别转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E2基因在HeLa细胞中的表达。结果 HPV16 E2基因片段插入到pcDNA3.1(+)相同酶切位点,即构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E2;转染pcDNA3.1(+)/HPV16 E2的细胞,检测到HPV16 E2 mRNA。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E2能在HeLa细胞内有效表达。
- 周良陈杰唐双阳李薇余敏君朱翠明万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E2
- GFP-HPV16 E2及其删除突变体融合蛋白在真核细胞中的表达与定位被引量：1
- 2010年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型E2(HPV16 E2)及其N端(TAD)、C端(DBD)删除突变体与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,观察其在Hela细胞中的表达与定位。方法HPV16 E2基因经PCR扩增后,与pMD-T载体连接,经蓝白斑筛选、PCR、双酶切鉴定及序列分析后,将E2基因亚克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2。PCR扩增TAD、DBD基因片段,将其双酶切后插入pEGFP-C1,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD。将3种质粒转染Hela细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达与定位。结果重组载体经PCR、双酶切鉴定及测序证明插入片段序列正确,且在Hela细胞中能表达目的蛋白;GFP-E2融合蛋白在细胞核与细胞质中都有表达,但主要分布于细胞核;而GFP-DBD融合蛋白仅在细胞核内;GFP-TAD融合蛋白仅在细胞质中。结论构建的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2、pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD均在Hela细胞中表达,并确定了各自在细胞内的定位。
- 陈杰陈苏芳唐双阳李薇万艳平
- 关键词：HPV16E2
- 人乳头瘤病毒16型E2蛋白对巨噬细胞分泌活性及凋亡的影响
- 目的：构建人乳头瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白及其N端结构域（TAD）和C端结构域（DBD）与绿色荧光蛋白（GFP）融合蛋白真核表达载体，观察融合蛋白在Hela细胞或巨噬细胞（MΦ）中的定位。研究HPV16E2蛋白及...
- 陈杰
- 关键词：HPV16E2蛋白巨噬细胞凋亡IL-1Β
- 文献传递
- GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位被引量：3
- 2010年
- 目的研究GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。方法 PCR扩增HPV16E5基因片段,将其连接到真核表达载体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定,构建表达载体pEGFP-C1/HPV16 E5;将质粒pEGFP-C1/HPV16 E5和pEGFP-C1分别转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。结果 GFP荧光均匀分布在细胞浆和细胞核;GFP-HPV16 E5融合蛋白组荧光分布在细胞浆。结论 GFP-HPV16 E5融合蛋白能在HeLa细胞内表达且定位于细胞浆。
- 唐双阳陈杰李薇周良余敏君朱翠明万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E5
- 阴道镜联合病理活检对宫颈病变筛查的价值被引量：1
- 2010年
- 目的评价阴道镜联合病理活检对宫颈病变的诊断价值。方法应用电子阴道镜检查与病理活检合用对宫颈病变进行筛查,以病理组织学诊断为标准,对结果进行分析。结果电子阴道镜检查6 812例,3 042例在阴道镜下活检,病理结果显示:宫颈癌54例(1.78%),宫颈上皮内瘤样变(C IN)270例(8.88%),其中C INⅠ级138例(4.54%),C INⅡ级68例(2.24%),C INⅢ级38例(1.25%),C IN合并湿疣26例(0.85%);湿疣12例(0.39%);慢性宫颈炎2 700例(88.75%);其他6例。结论电子阴道镜检查联合镜下病理活检更利于早期宫颈癌和癌前病变的检出,对宫颈病变的诊断具有重要的价值。
- 陈杰陈忠东
- 关键词：阴道镜检查病理检查宫颈病变
- HPV18-E2与IL-12联合基因疫苗免疫效果研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究人乳头瘤病毒18型E2基因（HPVl8-E2）疫苗的免疫效果及白细胞介素-12（IL-12）对其免疫作用的影响。方法选6～8周龄Balb／c雌性小鼠35只，随机分为5组，即PBS组、pcDNA3．1（＋）空质粒组、pcD．NA3．1（＋）／E2组、pcDNA3．1（＋）／IL-12组和pcDNA3．1（＋）／E2＋pcDNA3．1（＋）／IL-12组，每组7只。小鼠肌肉注射DNA疫苗，200ug/次。隔2周免疫1次，共免疫4次。于0、2、4、6周剪尾取血，第8周摘眼球放血。ELISA测血清中的特异性IgG抗体及小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ、IL-4，MTT比色法检测淋巴细胞的增殖。结果免疫8周pcD—NA3．1（＋）／E2及pcDNA3．1（＋）／E2＋pcDNA3．1（＋）／IL-12疫苗组抗体IgGA值显著升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），pcDNA3．1（＋）／E2及pcDNA3．1（＋）／E2＋pcDNA3．1（＋）／IL-12组小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ、IL-4水平明显高于其他对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），pcDNA3．1（＋）／E2＋pcDNA3．1（＋）／IL-12组小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显增强，与pcDNA3．1（＋）／E2组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与其他对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论pcDNA3．1（＋）／E2＋pcDNA3．1（＋）／IL-12核酸疫苗联合免疫小鼠能够有效的诱导细胞免疫和体液免疫应答，且免疫效应比pcDNA3．1（＋）／E2基因疫苗强。
- 阳帆张琴朱翠明陈苏芳陈杰万艳平
- 关键词：HPV18E2IL-12疫苗
