司有辉
- 作品数：14 被引量：37H指数：4
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达
- 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及序列测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了...
- 姚清侠钱平曹毅徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：口蹄疫病毒抗原表位猪Γ-干扰素
- 文献传递
- 利用酵母双杂交系统筛选与猪2型链球菌透明质酸酶(HYL)相互作用的蛋白质被引量：2
- 2009年
- 以猪链球菌2型(SS2)透明质酸酶(HYL)作为诱饵蛋白,利用CytoTrap酵母双杂交系统,从人的肺组织cD-NA文库中筛选与HYL相互作用的蛋白,探索HYL在SS2致病中的作用。首先,通过PCR扩增SS2Hyl全长基因,定向克隆到pSos载体多克隆位点中,构建诱饵载体(pSos-Hyl)。同时,将Hyl克隆到pET-28c载体中,构建重组表达载体(pET28c-Hyl)。将pSos-Hyl和人肺cDNA文库(pMyr-cDNA)共转化cdc25H酵母细胞,筛选与HYL相互作用的阳性克隆。经过筛选和重复验证,并对所得到的载体插入片段进行测序,经BLAST分析,从人肺组织cDNA文库中得到2个与HYL相互作用的阳性克隆,2个基因分别与γ内收蛋白(Homo sapiens adducin 3(gam-ma)(NT_030059.12),ADD3)和装配架离子转运蛋白(Homo sapiens chromosome 6 genomic contig,reference as-sembly ion transporter protein(NT_034880.3),AITP)基因的同源性为99%和100%。将HYL原核表达,ADD3和AITP真核细胞表达后,用免疫共沉淀试验分别验证了HYL与ADD3和AITP之间的相互作用,为进一步研究ADD3和AITP可能与SS2致病的关系奠定了前期基础。
- 吴涛常海涛谭臣付婷司有辉贝为成陈焕春
- 关键词：猪链球菌2型透明质酸酶酵母双杂交
- 具有中和活性的西尼罗病毒单克隆抗体及其制备方法与应用
- 本发明提供了一种具有中和活性的西尼罗病毒单克隆抗体及其制备方法与应用。本发明通过将灭活西尼罗病毒作为抗原对小鼠进行免疫试验，并在免疫试验过程中对小鼠血清的中和效价进行监测，筛选出血清中和效价最高的小鼠；再将骨髓瘤细胞SP...
- 司有辉杨梦洁曹胜波魏宁冯雨祥叶静朱碧波艾青
- JEV NS1'通过与宿主蛋白CDK1互作调控IFN-β机制探究
- 引言日本乙型脑炎(简称乙脑)简称乙脑,是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一[1]。该病对人类健康造成巨大威胁,同时乙脑也是危害我国养猪...
- 李秋燕周登元贾凡司有辉曹胜波叶静
- 猪γ-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒作用被引量：12
- 2008年
- 为了获得高效分泌表达重组猪γ-干扰素(rPoIFNγ) ,将去除信号肽的编码梅山猪γ-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNγ)插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC 9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC 9K-mPoIFNγ。将线性化的pPIC9K-mPoIFNγ以化学方法(LiCl)转化入毕赤酵母菌株GS115(组氨酸缺陷型) ,转化子经MD平板筛选和PCR分析鉴定后,以G418(4 g/L)筛选到多拷贝菌株。SDS-PAGE和Western-blot检测结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出17 000和23 000左右的mPoIFNγ特异蛋白,其表达量约为120 mg/L,占分泌型总蛋白的65 %;细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,结果表明rPolIFNγ具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为1.67×106U/mg。
- 姚清侠黄勤锋曹毅司有辉钱平陈焕春
- 关键词：猪Γ-干扰素毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
- 猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性被引量：8
- 2007年
- 为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法（LiCl）,与鲑鱼精DNA（ssDNA）共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明：表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%-30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸（pH2）,对热（56℃）部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法（CPE50）测定干扰素抗病毒活性,在MDBK（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×10^6U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
- 姚清侠曹毅钱平徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抗病毒活性口蹄疫病毒
- 抗猪CD14单克隆抗体的制备方法及其应用
- 本发明提供了一种抗猪CD14单克隆抗体的制备方法及其应用。本发明通过原核表达并纯化猪CD14蛋白作为抗原对小鼠进行免疫试验，并在免疫试验结束后对小鼠血清效价进行检测，筛选出血清效价最高的小鼠；再将骨髓瘤细胞与筛选出的血清...
- 司有辉冯雨祥曹胜波解冉叶静朱碧波艾青
- 口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达被引量：7
- 2007年
- 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,重组蛋白分子量约为66 Ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示表达的重组蛋白占菌体总蛋白的37.4%,且主要以包涵体的形式存在。包涵体以SKL变性后,经PEG4000、氧化型谷胱苷肽和还原型谷胱苷肽复性。粗提产物以CPE_(50)测得重组蛋白在MDBK细胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性达到1600 U/mL,说明表达产物具有干扰素的生物学活性,为下一步基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 姚清侠钱平曹毅郭东春徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：口蹄疫病毒抗原表位猪Γ-干扰素
- 谷氨酰胺合成酶GlnA及其转录调节因子GlnR对2型猪链球菌致病力影响的研究
- 2型猪链球菌病/(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2/)是一种人畜共患病原菌,可以引起人和猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎等,病死率高,危害大。谷氨酰胺合成酶GlnA是氮代谢...
- 司有辉
- 文献传递
- 重组腺病毒介导的猪α干扰素的制备
- 亚克隆猪α干扰素(PoIFNα)基因,并将其插入腺病毒穿梭载体 pShuttle-CMV, 构建成重组质粒 pSh-PoIFNα。将此重组质粒经 Pme Ⅰ线性化和去磷酸化后回收,与腺病毒骨架载体 pAdEasy-1共同...
- 姚清侠曹毅钱平徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：Α-干扰素腺病毒
- 文献传递
