张勇
- 作品数：36 被引量：161H指数：8
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Cdc42基因在表皮生长因子促进HepG2细胞丝状伪足形成中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨表皮生长因子(EGF)对HepG2细胞丝状伪足形成和细胞体外侵袭能力的影响以及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在其中的作用.方法:将Cdc42siRNA转染HepG2细胞株,RT-PCR和Westernblot检测EGF组、EGF+siRNA干扰组、siRNA干扰组及空白对照组细胞Cdc42mRNA转录以及蛋白的表达水平,微丝绿色荧光探针(actin-trackergreen)染色检测HepG2细胞丝状伪足形成,侵袭小室检测细胞体外侵袭能力.结果:经EGF处理后HepG2细胞可见明显丝状伪足形成,EGF组细胞内Cdc42mRNA及总蛋白(Total-Cdc42)表达量无显著变化,但活性Cdc42(Active-Cdc42)显著增高(0.713±0.021vs0.423±0.015,P<0.05),siRNA干扰组Cdc42表达及活性受到明显抑制(0.118±0.017vs1.128±0.024;0.351±0.021vs0.936±0.024,均P<0.05),并抑制EGF诱导的细胞丝状伪足形成,EGF组细胞体外侵袭能力显著高于其余各组(98.43±3.11vs61.09±3.58,50.53±2.34,62.73±2.64,均P<0.05).结论:EGF通过激活Cdc42诱导HepG2细胞丝状伪足形成并增强其体外侵袭能力.
- 张勇江隆昌胡青钢刘小卫熊俊郑启昌
- 关键词：表皮生长因子肝癌RNA干扰
- 经乳晕旁切口乳房后进路乳管小叶区段切除治疗多发性导管内乳头状瘤被引量：3
- 2008年
- 目的探讨经乳晕旁切口及乳房后进路乳管小叶区段切除治疗多发性导管内乳头状瘤的可行性、效果及并发症预防。方法对该院2002年6月～2007年4月收治的年龄在40岁以上的19例乳腺多发性导管内乳头状瘤患者行多区段切除的临床资料进行回顾分析。结果18例患者均经乳晕旁切口及乳房后进路行乳腺小叶多区段切除术,手术顺利,术后恢复好,乳头无明显变形,患者感到满意,乳房及乳头感觉良好。1例患者因术中冷冻切片合并导管癌,行改良乳腺癌根治术。所有患者均无切口感染,1例发生皮下积液,经穿刺抽吸治愈。经0.25～4.6年随访,有1例患者因术中遗漏而再手术治愈。结论采用乳晕旁切口及乳房后进路行乳管小叶区段切除治疗多发性导管内乳头状瘤是可行的。掌握熟练的手术技巧,可取得较好的美容及治疗效果,并能保持良好的乳头及乳晕部位的感觉,避免了乳房单纯切除。
- 屈新才张波张勇黄韬王国斌
- 关键词：乳头状瘤
- 靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响被引量：8
- 2004年
- 目的:探讨转入靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响. 方法:设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列, 中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PSilencer2.1, 构建siRNA真核表达载体,经稳定转染HepG2细胞后对转基因后肿瘤细胞的生物学行为进行观察. 结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功.通过RT- PCR及流式细胞术检测,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin基因表达分别达73%和75%.转染细胞生长速度明显减慢,凋亡率增加15倍.裸鼠体内成瘤率下降75%,9-30 d肿瘤体积分别为0.10±0.01 cm3,0.30±0.03 cm3,0.39±0.11 cm3,0.45±0.13 cm3,0.49±0.07 cm3,0.58±0.01 cm3,0.60±0.10 cm3,0.65±0.07 cm3,与对照组相比差异显著(P<0.01). 结论:靶向survivin的siRNA能有效降低目的基因的表达并能在体内体外抑制肝癌细胞株HepG2的生长.为进一步逆转肿瘤细胞的耐药性提供了理论指导.
- 卢昕胡安斌张勇陈立波郑启昌
- 关键词：靶向SURVIVINSIRNA肝癌细胞生物学行为转基因
- 肿瘤坏死因子-α对肿瘤抑制基因RECK在HepG2细胞中表达的调节作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α对人肝癌细胞HepG2肿瘤抑制基因RECK表达的影响,检测核转录因子(NF)-kB在RECK基因表达的调控中的作用。方法将培养的细胞分为3组,A组用4种浓度的TNF-α(1、5、50、100μg/L)作用人肝癌细胞HepG2细胞株6h,B组用浓度为50μg/L的TNF-α分别作用HepG2细胞1、6、12、24 h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RECKmRNA的表达；C组将NF-kB抑制剂二硫代氨基甲酸吡硌烷(PDTC,10mol/L)与TNF-α(50λg/L)同时作用以及TNF-α(50μg/L)单独作用于HepG2细胞6 h,凝胶滞留电泳实验(EMSA)DNA结合反应检测NF-kB的活性,RT-PCR和Western blot分别检测RECK基因mRNA和蛋白的表达,明胶酶谱试验检测细胞MMP-9的活性。结果HepG2细胞中RECK基因无表达,TNF-α作用后RECK的表达显著增高,作用呈时间和剂量依赖关系(P＜0．01),TNF-α能激活NF-kB并能显著抑制HepG2细胞MMP-9的活性(P＜0．01),而PDTC能显著的抑制这种作用(P＜0．01)。结论TNF-α能上调RECK基因在肝癌细胞系HepG2中的表达同时抑制细胞MMP-9的活性。而NF-kB可能参与了这一过程。
- 郑启昌张勇秦涛卢昕熊俊
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α核转录因子-ΚB基因表达
- 人RECK基因的克隆与表达被引量：1
- 2005年
- 目的 克隆人RECK基因,构建其原核表达重组体,并进行初步表达。方法 从人的胎盘组织中提取总RNA, 经逆转录聚合酶链反应扩增出RECK基因;将RECK基因克隆入pGEM T载体中,构建克隆载体pGEM RECK,阳性克隆经酶 切、电泳鉴定,测定RECK基因序列并确认后,构建原核表达重组体pBluescriptSK+ RECK,在工程菌BL21(DE3)中进行IPTG 诱导表达。结果 PCR扩增得到了特异性的4.4kb基因片段。基因片段的大小与预期一致。所获得的RECK基因测序正确, 原核表达载体表达重组蛋白,经SDS PAGE及Western blot分析,相对分子量为110kD。结论 成功地克隆了人RECK基因并 构建了原核表达重组体pBluescriptSK+ RECK,此重组体能高效表达RECK蛋白。
- 张勇郑启昌卢昕秦涛吕文利
- 关键词：基因重组体阳性克隆逆转录聚合酶链反应IPTGT载体
- siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究被引量：7
- 2004年
- 目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体Psilencer2 1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Sur vivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论 构建的Psilencer (+) Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。
- 卢昕郑启昌熊俊张勇秦涛
- 关键词：SURVIVIN基因肝癌细胞株HEPG2定向克隆
- Cdc42在人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株MCF-7/Adr中表达的变化以及对细胞耐药性的影响。方法将Cdc42 siRNA转染MCF-7/Adr细胞株后,用RT-PCR和Weastern Blot方法检测MCF-7组,MCF-7/Adr组,MCF-7/Adr siRNA干扰组细胞Cdc42的转录以及蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定siRNA处理后阿霉素(ADM)对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用;用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果 MCF-7/Adr细胞中Cdc42 mRNA及蛋白表达量显著高于MCF-7细胞(P<0.05);siRNA干扰后Cdc42表达受到明显抑制(P<0.05),并显著提高细胞内ADM的浓度(P<0.05)。结论特异性siRNA能明显抑制Cdc42 mR-NA及蛋白表达,并逆转细胞耐药性。
- 张勇江隆昌屈新才胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：多药耐药小RNA干扰
- TNF-冄激活大鼠胆管上皮细胞Jagged-1的表达并诱导其上皮-间质转化
- 2016年
- 目的:检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)对体外培养的原代大鼠肝内胆管上皮细胞Jagged-1表达的影响以及诱导其间质-上皮转化的作用.方法:原代胆管上皮细胞分为对照组,TNF-α处理组(10 ng/mL),TNF-α加核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)(50冚mol/L)处理组及PDTC单独处理组,72 h后Western blot法检测各组细胞Jagged-1蛋白、间质细胞标记成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein 1,FSP-1)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)和胆管细胞特异性标记角蛋白19片段(cytokeratin 19,CK19)的蛋白的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB蛋白结合活性.倒置显微镜观察各组胆管细胞的形态变化,Transwell小室法检测细胞的迁移能力.结果:TNF-α处理组胆管上皮细胞NF-κB的活性增强,Jagged-1、FSP-1、Vimentin和α-SMA蛋白的表达水平上调,CK19的表达下调,细胞迁移能力增强,细胞形态由鹅卵石样向梭形样转化.TNF-α+PDTC与TNF-α组相比其NF-κB活性明显减弱,Jagged-1,FSP-1,Vimentin和α-SMA蛋白水平降低,CK19表达升高,细胞迁移能力减弱,细胞形态向鹅卵石样转化.结论:TNF-α可通过激活NF-κB信号上调Jagged-1蛋白表达的同时诱导大鼠胆管上皮细胞向间质细胞转化.
- 李潼郭兵高杨于奇宏李锦锦鲜文静蒋帅郑启昌张勇
- 关键词：胆管上皮细胞上皮-间质转化
- TNF-α对人肝细胞Mfn2基因表达的调节及对线粒体形态功能的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝细胞株LO2细胞线粒体融合蛋白基因2(Mfn2)基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)生成的影响.方法:利用脂质体Lipofectamine2000将Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染肝细胞株LO2细胞,以终浓度为500kU/L的TNF-α作用LO2细胞株和稳定高表达Mfn2的LO2细胞株12h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞Mfn2mRNA转录水平以及蛋白的表达水平,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)染色观察线粒体形态变化,荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞ATP含量,荧光探针DCFH-DA测定细胞ROS生成水平.结果:经TNF-α处理后LO2细胞中Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组(0.279±0.026vs0.742±0.018;0.196±0.024vs0.580±0.011,P<0.05);对照组及转染Mfn2基因组肝细胞线粒体形态主要为丝状网络或长柱状,TNF-α处理后未转染肝细胞线粒体断裂成点状碎片,但转染组线粒体形态则无明显改变;TNF-α处理后LO2细胞内ATP浓度显著下降(2.00μmol/g±0.15μmol/g vs5.81μmol/g±0.31μmol/g,P<0.05),而ROS生成水平较空白对照组显著升高(FI:80.68±4.02vs65.44±3.47,P<0.05),但转染组细胞内ATP下降水平要显著低于未转染组,而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P<0.05).结论:TNF-α通过抑制肝细胞Mfn2的表达诱导线粒体形态改变及线粒体功能障碍.
- 张勇江隆昌胡文君胡青钢郑启昌
- 关键词：肿瘤坏死因子Α三磷酸腺苷活性氧
- 芳香化酶P450在肥大乳房乳腺组织中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的探讨芳香化酶P450在肥大乳房乳腺组织中的表达情况。方法采用免疫组织化学SP法，检测28例肥大乳房和12例正常体积乳房乳腺组织中芳香化酶P450的表达情况。并应用SPSS13．0统计软件进行统计分析，组间比较采用Fisher精确概率检验。结果在肥大乳房组28例患者中有11例呈芳香化酶阳性表达，阳性表达率39．29％；在正常体积乳房组12例患者中无芳香化酶阳性表达，组问比较差异有统计学意义（P〈0．05）。腺性肥大组与脂性肥大组的芳香化酶阳性表达率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。在分别按哺乳史和乳房肥大及下垂的程度的分组中，芳香化酶阳性表达率比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论芳香化酶P450在肥大乳房乳腺组织中存在过表达，可能参与肥大乳房的形成。
- 张勇孙家明
- 关键词：芳香化酶P450乳房乳腺组织
