张静
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 微小隐孢子虫cDNA文库的构建与免疫学筛选
- 2013年
- 【目的】构建微小隐孢子虫cDNA文库,以筛选出可替代天然抗原用于诊断的重组抗原。【方法】首先纯化微小隐孢子虫卵囊,用Trizol Reagent提取总RNA,构建全长cDNA;分别用蛋白酶K与Sfi消化、酶切处理cDNA,采用Column Spin H-1000分离柱分离cDNA,连接λTriplEx2载体,构建cDNA文库。扩增cDNA文库,用兔抗微小隐孢子虫血清作探针对cDNA文库进行初筛和复筛,将复筛得到的阳性克隆连接PMD18-T载体,测序后进行序列比对。【结果】微小隐孢子虫cDNA文库噬菌斑插入片段长度为1.5kb左右,库容大于107。经过筛选共获得了20个微小隐孢子虫阳性克隆,测序后从中选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,分别为MUCIN蛋白、乳酸脱氢酶、微管相关蛋白和子孢子抗原蛋白。【结论】成功构建了微小隐孢子虫cDNA文库,并筛选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,为隐孢子虫的血清学诊断提供了重组抗原。
- 高依然张静韩福松陆慧君姜宁陈启军尹继刚
- 关键词：微小隐孢子虫CDNA文库构建免疫学筛选
- 18S rRNA基因巢式PCR-RFLP鉴定吉林、大庆地区断奶前奶牛隐孢子虫分离株被引量：4
- 2011年
- 利用18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定吉林、大庆地区牛源隐孢子虫分离株。采取吉林、大庆地区断奶前犊牛粪便,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA4.0软件进行同源性和系统发育树分析。同时扩增产物分别用SspⅠ、VspⅠ和MboⅡ酶切后进行RFLP分析。通过18S rRNA基因PCR-RFLP分析和测序比对分析表明,吉林分离株包括2种隐孢子虫,分别为C.bovis和C.ryanae。大庆分离株包括3种,分别为C.bovis、C.ryanae和C.andersoni。
- 苏艳白光彦孙喜东刘妍王春仁张静宋军澎尹继刚
- 关键词：安氏隐孢子虫RRNA
- 抗微小隐孢子虫TSP6蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的在大肠埃希菌中可溶性表达微小隐孢子虫TSP6抗原分子,并以其纯化产物为抗原,利用杂交瘤技术生产抗TSP6单克隆抗体(McAb)。方法将pGEX-4T-1-TSP6重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经0.1mmol/LIPTG诱导表达后超声破菌,获得可溶性表达产物,通过Gluthathione-Sepharose 4B磁珠纯化蛋白质,以纯化的重组TSP6为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA和有限稀释法筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及效价,Western blot分析其特异性。结果筛选出2株杂交瘤细胞能稳定分泌抗TSP6单克隆抗体,经鉴定均为IgG1。Western blot分析显示,制备的单抗均能与相应的重组蛋白特异性结合。结论制备的抗TSP6杂交瘤细胞株能分泌高特异性的McAb。
- 张静赵继学韩福松高依然陆慧君姜宁尹继刚
- 关键词：微小隐孢子虫可溶性表达单克隆抗体
- 东北地区部分犊牛感染贾第虫的基因型及基因亚型分析被引量：6
- 2012年
- 采用巢式PCR方法鉴定东北部分地区牛源贾第虫的基因型。提取DNA后经巢式PCR扩增TPI基因,扩增产物测序后用BLAST和MEGA 4.0软件进行同源性和系统发育分析。结果表明,吉林市和长春分离株属于蓝氏贾第虫的Assemblage E型;大庆分离株中蓝氏贾第虫的Assemblage E和Assemblage A型均存在。
- 张静苏艳白光彦王春仁高依然韩福松姜宁陈启军尹继刚
- 关键词：贾第虫基因型基因亚型
- 长春地区医院就诊患者隐孢子虫感染的血清学检测被引量：1
- 2011年
- 表达并纯化微小隐孢子虫表面抗原CP23重组蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性。采集2010年8～11月份长春市部分医院的各年龄段患者血清,用间接ELISA法检测血清中抗CP23的IgG抗体。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白CP23能被感染微小隐孢子虫的牛血清和人阳性血清识别,不能被感染日本血吸虫的小鼠血清、恶性疟患者血清和人阴性血清识别。共采集血清2 046份,总阳性率为3.2%(65/2 046),男性和女性阳性率分别为2.7%(28/1 036)和3.7%(37/1 010),性别间差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄段人群的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),71～80岁年龄段的阳性率最高(8.6%,13/152)。
- 宋军澎赵继学高虹刘妍岳红霞张静苏艳尹继刚
- 关键词：隐孢子虫ELISA
