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酵母表面展示T载体构建及目的蛋白的表面展示: 2014年; 构建一种能对PCR产物进行直接克隆并展示于酵母表面的新型T载体。根据酵母表面展示载体p YD1多克隆位点序列设计出利用两端带有XcmⅠ内切酶酶切位点的含有黄色荧光蛋白基因的XcmⅠ酶切盒,通过NheⅠ和XhoⅠ酶切位点插入到p YD1载体上形成质粒p YD-YFP,并对其进行酶切鉴定和DNA测序分析,再经XcmⅠ酶切后形成两端带有d T的表面展示T载体。利用PCR扩增两个含有荧光蛋白的融合蛋白PCAD-CFP和PSR-Ds Red的基因并直接克隆到所构建的T载体中,检测其表达功能。酶切鉴定和DNA测序结果显示PCAD-CFP和PSR-Ds Red正确插入载体上,分别转化至酿酒酵母EBY100中,激光共聚焦显微镜下观察到相应的荧光的酵母,表明克隆有融合蛋白基因片段的载体成功在酵母细胞中进行表面展示,证明了所构建的酵母表面展示T载体具有直接克隆和表面展示目的蛋白的功能。; 梁秀怡梁志成朱筱刘诗雨张智田生礼; 关键词：T载体酵母表面展示真核表达

一种DNA片段的回收方法: 本发明公开一种DNA片段的回收方法，是一种新的DNA和琼脂糖同步回收方法，利用弱碱性的异硫氰酸胍溶液溶解含有目DNA的琼脂糖凝胶条，再加入预冷的异丙醇，琼脂糖析出形成沉淀析出，而大部分的DNA则存在于上清液中，通过离心即...; 田生礼梁秀怡梁志成; 文献传递

一种定向克隆方法及载体的改造方法及T载体: 本发明公开了一种定向克隆方法及载体的改造方法及T载体，所述定向克隆的方法包括：设计并合成酶切盒、构建T载体、形成两端带有突出的dT的线性化的T载体、生成目标基因PCR片段、构建含有目标基因的重组载体。本发明定向TA克隆技...; 田生礼梁志成梁秀怡刘士德

乳酸克鲁维酵母表达型T载体的研发及应用: 2014年; [目的]构建以乳酸克鲁维酵母表达载体p KLAC2为基础的表达型T载体。[方法]利用定点突变技术突变载体p KLAC2上的XcmⅠ位点,获得表达载体p KL-MUT;PCR扩增含黄色荧光蛋白基因的XcmⅠ酶切盒,通过EcoRⅠ和XhoⅠ位点连接至表达载体p KL-MUT,构建成重组载体p KL-YFP,限制性内切酶XcmⅠ酶切后即产生T载体p KL-T。连接融合基因14-3-3-Zs G转化至乳酸克鲁维酵母GG799。[结果]利用该T载体可成功克隆外源基因14-3-3-Zs G并在乳酸克鲁维酵母中表达14-3-3-Zs G蛋白,荧光和Western blotting验证正确。[结论]乳酸克鲁维酵母表达型T载体已成功构建,具有快速克隆高效分泌表达外源基因的特点,对于促进乳酸克鲁维酵母表达系统表达相关蛋白的产业化具有实际意义。; 梁秀怡梁志成刘雯莉何洁凝张智田生礼; 关键词：乳酸克鲁维酵母真核表达

一种定向克隆方法及载体的改造方法及T载体: 本发明公开了一种定向克隆方法及载体的改造方法及T载体，所述定向克隆的方法包括：设计并合成酶切盒、构建T载体、形成两端带有突出的dT的线性化的T载体、生成目标基因PCR片段、构建含有目标基因的重组载体。本发明定向TA克隆技...; 田生礼梁志成梁秀怡刘士德; 文献传递

一种从琼脂糖凝胶中同步回收DNA和琼脂糖的方法被引量：2: 2015年; 介绍一种从琼脂糖凝胶同步回收DNA和琼脂糖的方法。利用0.25 mol/L异硫氰酸胍溶液(p H 8.0)溶解含有目的 DNA片段的的凝胶条,胶条溶解后,静置冰上10 min再加入预冷的异丙醇,琼脂糖呈颗粒状析出,通过离心即可初步分离DNA和琼脂糖。上清液用异丙醇沉淀回收DNA片段,利用50%PEG溶液沉淀琼脂糖。分别对0.2 kb、1 kb和10 kb长度的DNA片段进行回收,回收率分别为19.44%、36.40%、13.49%,回收的DNA纯度高,电泳条带清晰。琼脂糖均回收率为62.52%,回收琼脂糖脱水后的状态为白色颗粒。该方法切实可行,回收成本低廉,回收的DNA和琼脂糖可用于后续实验。; 梁秀怡梁志成田生礼; 关键词：琼脂糖 DNA

一种DNA片段的回收方法: 本发明公开一种DNA片段的回收方法，是一种新的DNA和琼脂糖同步回收方法，利用弱碱性的异硫氰酸胍溶液溶解含有目DNA的琼脂糖凝胶条，再加入预冷的异丙醇，琼脂糖析出形成沉淀析出，而大部分的DNA则存在于上清液中，通过离心即...; 田生礼梁秀怡梁志成; 文献传递

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梁志成