孔冬冬
- 作品数：29 被引量：70H指数：5
- 供职机构：首都师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 一种嵌合纤维小体及其应用
- 本发明涉及复合酶技术领域，尤其涉及一种嵌合纤维小体及其应用。所述嵌合纤维小体由漆酶、过氧化物酶和溶解性多糖单加氧酶组装而成。本发明通过将漆酶、过氧化物酶和溶解性多糖单加氧酶组装成嵌合纤维小体形式的复合酶，克服了漆酶和过氧...
- 田沈杨秀山杜济良孔冬冬
- 龙胆FtsZ基因的克隆及其在花瓣发育过程中的表达被引量：4
- 2002年
- 以用RT-PCR从龙胆中克隆的FtsZ基因的cDNA片段(约800bp)作为探针,从cDNA文库中筛选到全长cDNA。递推氨基酸序列分析表明,该cDNA编码的多肽具有FtsZ蛋白的典型保守序列,N端氨基酸序列具有质体导肽特征,推测在叶绿体内起作用,随着龙胆花瓣发育进程,与质体分裂相关的FtsZ基因表达逐渐减弱,类胡萝卜素生物合成代谢途径中的Zds基因表达逐渐增强;叶绿素含量降低而类胡萝卜素含量增高,叶绿体逐渐转变成花色体,花色由绿转黄。
- 何奕昆朱长甫王东孔冬冬孙敬三
- 关键词：质体分裂龙胆基因克隆
- 烟草ftsZ基因表达对质体发生的影响被引量：3
- 2002年
- FtsZ是广泛存在于原核生物和高等植物中的一种功能蛋白,它控制着原核细胞和质体的分裂过程.为进一步认识原核细胞和质体分裂的分子机制及真核细胞的起源和进化等重要问题,研究了该基因的表达调控特征.从烟草克隆ftsZ cDNA,构建了谷胱甘肽转移酶(GST)与FtsZ融合蛋白的表达质粒,并将其导入到在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下能高效表达的大肠杆菌JM109中.高表达的融合蛋白通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后,用以免疫兔子制备抗血清.免疫印迹法表明烟草frsZ基因的表达具有明显的组织器官特征,在质体(叶绿体)分裂活跃的部位表达强,其表达量为幼嫩花瓣>幼叶>幼根>老叶>茎.黑暗培养1d对ftsZ基因表达似乎无影响,随黑暗培养时间延长,FtsZ蛋白表达逐渐降低,叶绿体转化成为体积小、数目众多(增加2～3倍)的淡黄色或白色质体.该实验结果证明,光对植物ftsZ基因表达很可能无直接影响,ftsZ基因表达的强弱是决定质体(叶绿体)分裂和细胞中质体(叶绿体)数目多少的主要原因之一.
- 董淑杰王东孔冬冬何奕昆孙敬三刘永胜
- 关键词：基因表达烟草免疫印迹法质体分裂叶绿体
- 叶绿体分裂相关基因NtFtsZ2-1在大肠杆菌中的表达与定位被引量：6
- 2002年
- FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的明显降低或异常升高均可阻断正常的细胞分裂过程进而导致丝状菌体的产生。我们为了研究烟草FtsZ蛋白与大肠杆菌FtsZ蛋白的异同,构建了烟草全长ftsZ2-1与绿色荧光蛋白EGFP的融合表达质粒并转化大肠杆菌JM109。融合表达质粒的过量表达导致宿主菌形成了丝状菌体。通过荧光显微镜观察发现NtFtsZ2-1-EGFP融合蛋白沿着宿主菌体的纵轴方向有规律地聚集成荧光点或荧光带,说明烟草FtsZ2-1蛋白能够识别宿主菌内分裂位点的定位信号并参与其细胞分裂复合物的组装。
- 孔冬冬王东胡勇鞠传丽何奕昆孙敬三
- 关键词：叶绿体大肠杆菌
- 水稻CSC11介导干热风/干旱诱导的钙信号调控雄蕊发育
- 2021年
- 【目的】水稻花期偶遇干热风/干旱,导致脆弱的生殖细胞快速失水,极大地降低产量,这一过程中钙离子作为通用的第二信使传导了干旱或其他逆境信号,但背后的分子机制尚不清楚。分析钙离子透过性胁迫反应阳离子通道家族(calcium-permeable stress-responsive cation channels,CSCs)基因的生理和分子功能,为研究作物干热风的感应机制提供新的理论基础和思路。【方法】采用电生理学和遗传学方法,利用双电极电压钳技术在水稻中鉴定得到一个具有典型特征的受体类-钙通道蛋白,名为OsCSC11,对其蛋白序列进行生物信息学和进化关系分析。运用qRT-PCR和GUS报告基因活性分析确认OsCSC11的表达模式,在拟南芥原生质体细胞和洋葱表皮细胞中瞬时表达OsCSC11-GFP融合蛋白,验证OsCSC11的亚细胞定位;同时利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得OsCSC11的突变体,并通过细胞学等手段分析突变体表型和相关生理功能。【结果】蛋白序列比对发现,OsCSC11具有CSCs家族成员典型的保守结构域DUF221,但与其他成员序列差异大,存在不同于其他成员的特异结构域(motif)属于独立的亚家族。OsCSC11主要在水稻的花药和叶片中表达,进一步分析发现全长OsCSC11处于静息状态,可被高渗透溶液激活;但是删除N端156氨基酸(TM1-3)之后的OsCSC11^(ΔTM1-3)具有组成型的通道活性,特异选择钙、镁二价阳离子;推测TM1-3是这类通道的受体结构域,感应干热风胁迫,而OsCSC11^(ΔTM1-3)区域负责钙信号产生。OsCSC11和OsCSC11^(ΔTM1-3)均定位在细胞质膜上,与其干热风的受体功能相适应。与野生型相比,功能缺失突变体oscsc11-1和oscsc11-2的雄蕊较小、花药表面蹙皱,整体多呈弯曲状态,花粉含水量较低,败育率高达60%—70%。【结论】OsCSC11是水稻感应短期干热风/干旱刺激、介导钙离子内流,调控花药水分状态和花粉发育的受体类钙通道,可能参与了水稻
- 任志杰李倩孙钰佳孔冬冬刘良玉侯聪聪李乐攻
- 关键词：水稻花粉败育
- 烟草叶绿体分裂基因NtFtsZ1-2的启动子序列(英文)
- 2002年
- 孔冬冬王东胡勇鞠传丽何奕昆孙敬三
- 关键词：烟草启动子序列
- 针灸疗法治疗偏头痛临床研究近况被引量：5
- 2014年
- 总结近几年来针灸治疗偏头痛的临床进展,以便为治疗和研究本病提供完善的方法与资料。查阅相关文献,从毫针针刺、刺络放血、艾灸疗法、电针治疗、火针疗法、耳综疗法、推拿疗法、蜂针疗法等8个方面,对偏头痛的有效治疗措施进行汇总。针灸本着"通其经脉,调其血气"的原则,取得了较好的临床效果。针灸治疗偏头痛疗效确切,治疗手段甚多,但也应着重于辨证取穴、针刺手法等。
- 孔冬冬张永臣杨佃会
- 关键词：偏头痛针灸疗法
- 烟草中叶绿体分裂相关基因ftsZ cDNAs的克隆及其在E.coli中的表达
- 烟草是进行植物分子生物学研究的理想的模式材料。本论文应用
RT-PCR方法从烟草叶片中克隆了两个质体分裂相关基因NtFtsZ1和
NtFtsZ2的cDNAs，其中NtFtsZ2...
- 孔冬冬
- 文献传递
- 内关穴古代文献考究被引量：5
- 2015年
- 检索清代以前文献,结合现代研究对内关穴的认识,对内关穴穴区定位、针刺深度、灸法操作进行了较为全面的总结。认为第一腕横纹正中直上两寸,两筋之间为内关穴定位的最佳描述;3分、5分或1.4寸为内关穴常用针刺深度;艾灸内关穴治疗作用较为显著,但以艾灸3壮为佳。
- 孔冬冬张永臣贾红玲
- 关键词：内关针刺深度艾灸古籍文献
- 烟草质体分裂相关基因NtFtsZ cDNAs的克隆及功能分析被引量：3
- 2002年
- 通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)方法从烟草中克隆了两个质体分裂相关基因NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2的cDNA,推导的氨基酸序列分析表明,两者均具有FtsZ蛋白的典型特征和GTP结合位点;N端氨基酸序列分析也表明,NtFtsZ1-1和NtFtsZ1-2都具有质体导肽特征,发现了在高等植物中至少存在两个具有质体导肽的FtsZ;基于氨基酸序列的分子谱系分析也支持这一结果,核酸杂交表明两者在植物的不同发育时期具有相似的表达诺,将这两个基因转入E.coli中表达,它们能影响宿主菌的正常分裂,初步验证了其功能,这些研究提示在高等植物中FtsZ可能具有更多样化的功能。
- 王东孔冬冬胡勇鞠传丽何奕昆孙敬三
- 关键词：CDNAS烟草原核表达基因克隆
