胡秀华
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：清华大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：环境科学与工程更多>>
- 水环境中轮状病毒分子生物学检测技术被引量：3
- 2007年
- 轮状病毒是重要的水介传播病原体,其感染性强,稳定性高,是水环境中危害严重的病原微生物,快速、准确地检测水环境中的轮状病毒对于控制疾病爆发和保障水质公共卫生安全极为重要。本文系统介绍了水环境中病毒浓集方法、核酸提取方法以及分子生物学检测方法,综述了水中轮状病毒浓集和分子生物学检测方法的研究进展,并探讨了分子生物学方法在检测水环境中轮状病毒存在的问题及发展趋势。
- 李丹何苗胡秀华施汉昌
- 关键词：环境工程轮状病毒分子生物学水环境
- 一种定量检测轮状病毒的方法及其专用标准品
- 本发明公开了一种定量检测轮状病毒的方法及其专用标准品。本发明的定量检测轮状病毒的标准品，是含有序列表中序列1的核苷酸序列的重组载体，或是含有所述重组载体的转基因宿主细胞。本发明的定量检测轮状病毒的方法，是分别以待检测样品...
- 何苗胡秀华刘丽施汉昌李丹
- 文献传递
- PCR技术检测水中轮状病毒的研究进展被引量：4
- 2008年
- 聚合酶链式反应,即PCR(polymerase chain reaction)技术,是一种快速扩增DNA或cDNA序列的方法.水环境中的轮状病毒是导致世界范围内婴幼儿腹泻的主要原因,严重危害着水质安全和人类健康.建立和完善水中轮状病毒灵敏、快速的检测方法对预防和控制水体疾病的暴发具有重要的意义.随着分子生物学技术的发展,PCR及其衍生技术因其具有高度灵敏性、特异性和准确性等特点,成为检测水中轮状病毒最常用的方法.本文综述了利用RCR及其衍生技术,包括逆转录聚合酶链式反应、逆转录半巢式和巢式聚合酶链式反应、多重逆转录聚合酶链式反应、免疫聚合酶链式反应、与免疫磁珠分离相结合的聚合酶链式反应、与细胞培养相结合的聚合酶链式反应及实时定量聚合酶链式反应等,检测水环境中轮状病毒的研究进展,并分析了这些PCR技术在检测水环境中轮状病毒时存在的问题及其应用前景.
- 胡秀华何苗刘丽施汉昌
- 关键词：水环境轮状病毒
- 一种检测感染性轮状病毒的方法
- 本发明公开了一种检测感染性轮状病毒的方法。该检测感染性轮状病毒的方法，是将待检测样品和轮状病毒的宿主细胞共培养，然后提取所述宿主细胞的总RNA，利用由核苷酸序列是序列表中序列1的核苷酸片段和核苷酸序列是序列表中序列2的核...
- 何苗李丹胡秀华施汉昌刘丽
- 文献传递
- 一种定量检测轮状病毒的方法及其专用标准品
- 本发明公开了一种定量检测轮状病毒的方法及其专用标准品。本发明的定量检测轮状病毒的标准品，是含有序列表中序列1的核苷酸序列的重组载体，或是含有所述重组载体的转基因宿主细胞。本发明的定量检测轮状病毒的方法，是分别以待检测样品...
- 何苗胡秀华刘丽施汉昌李丹
- 文献传递
- 水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建被引量：17
- 2008年
- 采用细胞培养和T-A克隆技术,在轮状病毒主要结构蛋白VP7基因序列上设计合成引物,经PCR扩增后将特异性产物连接入pGEM-T-easy载体中,经过酶切鉴定和测序分析获得轮状病毒cDNA标准品.利用常规PCR和实时定量PCR方法对所获得的cDNA标准品进行特异性、稳定性和重复性指标的检验.结果表明,利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系（斜率为-3.353,R^2=0.995）;实时定量PCR熔解曲线分析表明,温度在81℃±0.5℃的PCR产物是轮状病毒VP7序列上的特异性产物,表明此标准品是轮状病毒特异性的;同时,所制备的标准品在实时定量PCR检测中具有较大的线性范围（9×10^0～9×10^11copies/μL,每个反应最低可以检测到9个拷贝数的轮状病毒cDNA,表明利用该标准品进行实时定量PCR分析时具有较高的检测灵敏性;此外,该标准品具有较高的稳定性和重复性（3次独立实验CV值在0.2%～0.9%之间）,可长期稳定保存.构建的标准品可用作检测水环境中轮状病毒的实时荧光定量PCR的外标准品.
- 胡秀华何苗刘丽李丹施汉昌
- 关键词：轮状病毒克隆标准品实时荧光定量PCR
