薛璞
- 作品数：15 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原1相互作用蛋白的筛选及鉴定
- 韩红玉薛璞翟颀李聪朱雪龙董辉朱顺海赵其平黄兵
- 柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果被引量：7
- 2019年
- 本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×10^4个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。
- 王晔赵其平朱顺海董辉姜连连薛璞舒凡帆黄兵韩红玉
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫真核表达免疫保护效果
- 柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建及EtAMA1相互作用蛋白的初步筛选
- 鸡球虫属于顶复器艾美耳属原虫，生活史包括细胞内阶段的裂殖生殖、配子生殖和细胞外阶段的孢子生殖。子孢子是鸡球虫入侵肠道细胞的首要阶段，而且顶体膜蛋白1（AMA1）在子孢子阶段高表达，而其他顶复器原虫（弓形虫、疟原虫）的研究...
- 薛璞
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交CDNA文库
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析被引量：2
- 2012年
- 在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 孔春林韩红玉姜连连王晔董辉赵其平朱顺海李婷薛璞舒凡帆黄兵
- 关键词：球虫柔嫩艾美耳球虫毕赤酵母真核表达
- 柔嫩艾美耳球虫Serpin基因在293T细胞中的表达被引量：1
- 2015年
- 为了检测柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因(EtSerpin)在真核细胞293T中的表达情况,以Et孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增含完整Serpin开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtSerpin质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtSerpin.该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞,用间接免疫荧光法和Western blot鉴定EtSerpin基因的表达情况,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光,Western blot结果显示出大小约45.5kDa的目的蛋白条带,结果表明构建的EtSerpin可以在293T细胞中获得表达.
- 王晔韩红玉董辉赵其平朱顺海姜连连薛璞舒凡帆黄兵
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫293T细胞真核表达
- 柔嫩艾美耳球虫eIF3d基因及其应用
- 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫基因，该基因为编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的柔嫩艾美耳球虫eIF3d基因。本发明还公开了上述基因编码的蛋白质。本发明柔嫩艾美耳球虫eIF3d基因编码的重组蛋白对鸡球虫具有良好的免...
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- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达
- 为构建柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(Eimeria tenella rhoptry neck protein 2, EtRON2)基因的重组质粒pCAGGS-EtRON2,并转染293T细胞进行表达.以柔嫩艾美耳球虫孢...
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- 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究被引量：3
- 2013年
- 为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinases 3,EtCDPK3)基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-T easy载体,构建pGEM-Teasy-EtCDPK3重组质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGSEtCDPK3经过双酶切鉴定,可见1条大小约为1302 bp的目的条带,测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致;Western blot结果可见大小约为49 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。
- 王晔韩红玉董辉姜连连赵其平朱顺海薛璞舒凡帆黄兵
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫293T细胞真核表达
- 柔嫩艾美耳球虫4种基因的真核重组质粒构建与EtAMAl核酸疫苗的保护效果初步评价
- 究以柔嫩艾美耳球虫cDNA和鸡脾脏cDNA为模板,参照GenBank登录序列设计引物,引物上下游加入酶切位点,扩增了柔嫩艾美耳球虫顶体膜蛋白1基因(EtAMAl)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(EtSerpin)、棒状体颈部蛋白2...
- 王晔韩红玉姜连连赵其平薛璞朱顺海舒凡帆董辉黄兵
- 关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗免疫保护力重组质粒
- 柔嫩艾美耳球虫裂殖子酵母双杂交cDNA文库的构建
- 构建cDNA文库是获得生物某一阶段表达全部基因并进行基因筛选和功能研究的一种现代分子生物学方法,酵母双杂交cDNA文库适用于筛选相互作用蛋白,已在刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)等的研究中有所应用.
- 薛璞黄兵韩红玉金亚美姜连连董辉赵其平王晔朱顺海舒凡帆
