郑志华
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小菜蛾PGRP-SA的体外表达及介导酚氧化酶活力的研究
- 2016年
- 肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan Recognition Proteins,PGRPs)是可以识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的一类模式识别受体,在介导酚氧化酶级联反应中起着重要的作用。本研究以实验室克隆的小菜蛾Px PGRP-SA(Gen Bank No.EU399240)为基础,RT-PCR克隆了其开放阅读框(ORF),在原核细胞中获得了高效重组表达,利用GST一步纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备了抗血清,滴定效价为1∶51200。Western blot检测表明Micrococcus luteus和Serratia marcescens可以显著提高Px PGRP-SA在小菜蛾血淋巴中的含量。为了检测Px PGRP-SA与酚氧化酶PO的活力关系,本研究将Px PGRP-SA连接到真核表达载体p MT/Bip/V5/His A构建真核表达质粒p MTAPGRP,转染果蝇S2细胞中,获得稳定的细胞系,硫酸铜诱导获得表达后用anti-V5纯化获得重组蛋白Px PGRP-SA。将重组蛋白Px PGRP-SA与M.luteus和S.marcescens分别温育后,可以显著提高小菜蛾血浆中PO的活力。本研究结果阐明了重组蛋白Px PGRP-SA在小菜蛾体PO级联反应中的功能,为进一步研究Px PGRP-SA在小菜蛾体内免疫信号通路中的功能奠定了基础。
- 张玉清许小霞郑志华余静高延富欧阳莉娜金丰良
- 关键词：小菜蛾肽聚糖识别蛋白酚氧化酶细胞表达
- 一种小菜蛾肽聚糖识别蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种小菜蛾肽聚糖识别蛋白及其制备方法与应用。所示小菜蛾肽聚糖识别蛋白基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1～2所示。利用半定量RT-PCR检测了小菜蛾PGRP-S1在其体内的时空表达。本发明通过用玫烟色棒束孢处...
- 金丰良郑志华许小霞
- 文献传递
- 一种小菜蛾肽聚糖识别蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种小菜蛾肽聚糖识别蛋白及其制备方法与应用。所示小菜蛾肽聚糖识别蛋白基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1～2所示。利用半定量RT-PCR检测了小菜蛾PGRP-S1在其体内的时空表达。本发明通过用玫烟色棒束孢处...
- 金丰良郑志华许小霞
- 文献传递
- 一个调控抗菌肽表达的小菜蛾肽聚糖识别蛋白(PxPGRP-SA)被引量：3
- 2016年
- 【目的】肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)是昆虫免疫系统中一类重要的模式识别蛋白。本研究旨在阐明经苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis侵染后,小菜蛾Plutella xylostella PGRP-SA基因(命名为Px PGRP-SA)在体内的表达模式和对抗菌肽基因的表达调控。【方法】本研究利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析B.thuringiensis侵染小菜蛾幼虫后Px PGRP-SA的转录模式,通过RNAi技术结合抗血清封闭实验检测Px PGRP-SA对小菜蛾抗菌肽基因的表达调控作用。【结果】qRT-PCR检测表明,小菜蛾4龄幼虫在注射具有活性的B.thuringiensis 6 h后,Px PGRP-SA在脂肪体和血细胞中表达量迅速上升,其中脂肪体中的表达量在注射24 h后达到高峰,而在血细胞中的表达量在18 h后达到高峰。RNAi沉默小菜蛾4龄幼虫Px PGRP-SA的转录后,可显著降低小菜蛾脂肪体中cecropin,moricin-2,lysozyme和defensin 4个抗菌肽基因及Dorsal和Sptzle基因的mRNA转录水平;注射anti-Px PGRP-SA封闭小菜蛾体内Px PGRP-SA的活性后,也可降低小菜蛾脂肪体中4个抗菌肽基因的mRNA转录水平;Px PGRP-SA转录沉默后,同时导致添食B.thuringiensis的小菜蛾幼虫的存活率明显降低。【结论】Px PGRP-SA参与了小菜蛾体内抗菌肽cecropin,moricin-2,lysozyme和defensin基因的表达调控,并在免疫防御B.thuringiensis的侵染过程中起了重要的作用。
- 郑志华许小霞余静高延富张玉清欧阳莉娜金丰良
- 关键词：小菜蛾肽聚糖识别蛋白RNAI抗血清
