刘雄
- 作品数：16 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用
- 本发明公开了细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断EBOV感染中的应用。本发明所公开的细胞通路调控分子为TRAF2、TP53、CASP9、RIPK3、CASP7、CIAPIN1、TNF、BAX、CASP6、TYRO3、MS...
- 王慧李涛刘雄刘坤宁年智
- 文献传递
- 展示保护性抗原的细菌菌蜕及其应用
- 本发明公开了一种展示保护性抗原的细菌菌蜕及其应用。本发明保护展示保护性抗原或展示含有所述保护性抗原的融合蛋白的细菌菌蜕。所述保护性抗原可为引起手足口病的病毒的保护性抗原。所述引起手足口病的病毒可为肠道病毒或柯萨奇病毒组，...
- 王慧李涛房华丽刘雄
- 文献传递
- 埃博拉出血热临床预后相关的分子标识与应用
- 本发明公开了埃博拉出血热临床预后相关的分子标识与应用。本发明公开的EBOV出血热临床预后相关的分子标识为MS4A2、SYCN、LCE3E、FJX1、ARMS2、RMI2、PHLDA2、OPRM1、TGFBR3L、BEND...
- 王慧曹务春李涛刘雄江佳富户义邓永强刘坤宁年智
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证
- 2014年
- 目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。
- 李崭李涛陈芳红刘雄周育森王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌
- KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
- 2013年
- 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
- 刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧
- 关键词：细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶Β内酰胺类抗生素
- 超广谱β-内酰胺酶SHV-18的表达纯化及活性验证被引量：1
- 2013年
- 目的:产超广谱β-内酰胺酶是肠杆菌科细菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制,该类酶主要水解青霉素类、头孢菌素类以及单环酰胺类抗生素。自从1983年第一次有关β内酰胺酶的报道开始,至今已经发现超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的种类超过400种,其中SHV型是最常见的ESBLs类型之一。本研究主要探讨了超广谱β-内酰胺酶SHV-18的原核表达载体的构建、酶的纯化和活性验证。方法:利用肺炎克雷伯菌ATCC700603全基因组为模板,应用分子生物学技术钓取SHV-18基因,构建pET22b(+)-SHV-18表达质粒,经测序鉴定后,转化大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达并亲和纯化,进一步通过抗生素水解实验,检测其水解活性,测定其酶动力学参数。结果:成功构建了可以以裂解上清形式高效表达SHV-18的工程菌。通过亲和纯化最终获得纯度达到90%以上的β-内酰胺酶SHV-18。获得的SHV-18蛋白能够水解青霉素G、头孢拉定、头孢唑肟、头孢他啶、头孢吡肟等多个抗生素。结论:获得了对青霉素和头孢菌素类具有水解活性的超广谱β-内酰胺酶SHV-18,并对其酶动力学参数进行了检测。在实验室研究了β-内酰胺酶SHV-18对不同抗生素的水解特性,更加有利与指导临床抗生素的合理使用。
- 郭通刘雄刘传杰钱敏王琴李涛王慧
- 关键词：纯化酶动力学
- 一种蛋白质及其在制备抗微生物产品中的应用
- 本发明公开了一种蛋白质及其在制备抗微生物产品中的应用。本发明提供的多肽，如序列表的序列1所示、序列表的序列2所示、序列表的序列3所示或序列表的序列4所示。本发明还保护具有所述多肽的蛋白质、所述多肽的衍生物或含有所述多肽的...
- 王慧李涛刘雄郭峰郭通
- 文献传递
- EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价
- 2013年
- 目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。
- 房华丽王琴罗森高翔屠伟田仁茂刘雄李涛王慧
- 关键词：肠道病毒71型柯萨奇B3病毒融合蛋白
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7前噬菌体CP-933Y缺失突变株的构建
- 2016年
- 目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7前噬菌体片段CP-933Y,进而构建CP-933Y缺失突变株。方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株为模板,加入酶切位点PCR扩增前噬菌体CP-933Y上、下游各600 bp的同源臂序列;酶切后分别连接到p UC19-kan质粒的卡那霉素(包含FRT位点)抗性基因两侧,构建中间是卡那霉素抗性基因标记含有目的基因上、下游同源序列的线性片段;导入含有p KD46质粒的O157∶H7菌株中,利用Red编码的同源重组酶使该片段与目的基因上、下游发生同源重组,卡那霉素抗性基因置换菌株中CP-933Y前噬菌体片段,最后导入p CP20质粒去除卡那霉素抗性标记基因。结果:经PCR及测序验证,O157∶H7菌株中前噬菌体片段CP-933Y被敲除,敲除株与野生株具有相似的生长曲线。结论:构建了大肠杆菌O157∶H7前噬菌体CP-933Y缺失株,为进一步研究前噬菌体CP-933Y的功能奠定了基础。
- 张传朋刘雄李涛王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌前噬菌体RED重组系统
- 一种蛋白质及其在制备抗微生物产品中的应用
- 本发明公开了一种蛋白质及其在制备抗微生物产品中的应用。本发明提供的多肽，如序列表的序列1所示、序列表的序列2所示、序列表的序列3所示或序列表的序列4所示。本发明还保护具有所述多肽的蛋白质、所述多肽的衍生物或含有所述多肽的...
- 王慧李涛刘雄郭峰郭通
- 文献传递
