李东峰
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 宇佐美曲霉木聚糖酶基因xynⅡ在不同毕赤酵母中的分泌表达被引量：6
- 2008年
- 将宇佐美曲霉E001的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPXY-NII,将其经SalⅠ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和KM71,xynⅡ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌PXGL98(Mut+)和PXKL29(Muts)。该木聚糖酶基因在2株毕赤酵母中均实现了分泌表达。同时对工程菌的发酵条件进行了优化,在甲醇诱导下,PXGL98与PXKL29培养物上清液中的酶活力分别可达1156.92 U/mL和1646.03 U/mL。
- 周晨妍邬敏辰李东峰王瑾王武
- 关键词：宇佐美曲霉毕赤酵母分泌表达
- 木聚糖酶融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2007年
- 以来源于Aspergillus usamii E001的高比活木聚糖酶XynⅡ为亲本,采用"中心模板法"将耐高温木聚糖酶TfxA的前31个氨基酸连接在XynⅡ的N端,构建出融合木聚糖酶TPL。将TPL在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行表达,并对表达条件进行了优化,对表达产物的酶学性质进行了分析。结果表明,融合酶TPL最适pH为4.6,最适温度为45℃,和XynⅡ保持一致,但热稳定性有一定提高,在50℃处理10min,TPL和XynⅡ的残余酶活分别为15.72%和6.92%。
- 李东峰周晨妍白剑宇邬敏辰
- 关键词：热稳定性
- 木聚糖酶XynⅡ的D37N突变、表达及酶学性质变化被引量：11
- 2008年
- 对来源于宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001的木聚糖酶XynⅡ进行同源建模和序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存在一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关,据此设计了XynⅡ的D37N定点突变。酵母表达的XynⅡD37N经纯化后与原酶XynⅡ（同样经毕赤酵母表达后纯化）进行酶学性质比较,结果表明,XynⅡD37N的最适pH由4.2升高到5.3,pH稳定范围由3.0-7.5缩减为3.0-5.5,但最适温度和热稳定性基本保持不变。结果证实,木聚糖酶XynⅡ的第37位Asp与最适pH相关,为进一步的结构与功能研究提供了理论基础。
- 周晨妍李东峰邬敏辰王武
- 关键词：宇佐美曲霉突变木聚糖酶
