FLASH基因在野生型斑马鱼早期表达以及与HoxB4基因的关系 被引量:1 2018年 目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-Hoxb4-EGFP),实验对照组为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-EGFP),空白对照组为Tuebingen野生型斑马鱼的胚胎;采用FLASH反义mRNA探针做原位杂交并观察其表达。结果:观察到Tuebingen组中3. 7、9~24 hpf的神经外侧板、头部和脊索及18~30 hpf的原肾管可见黑色的阳性杂交信号,36 hpf后未见; 18~72 hpf的空白对照组与实验对照组间FLASH表达水平无差异,实验组18~30 hpf神经系统、造血系统FLASH的表达下调。结论:FLASH基因可能是Hox B4基因的下游靶基因。 金璐 丁可军 孙琮杰 陈露 周艳华 舒莉萍 何志旭关键词:斑马鱼 转基因 原位杂交 Irx5a基因过表达对斑马鱼胚胎早期造血的影响 2017年 目的探讨易洛魁族同源盒5a(Irx5a)基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFPmRNA斑马鱼胚胎作为实验组、显微注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA斑马鱼胚胎作为实验对照组、野生型斑马鱼作为空白对照组,应用qPCR检测相关造血转录调控因子在斑马鱼胚胎受精后9 h(9 hpf)、12 h、18 h、24 h和30 h时相的表达水平。结果实时荧光定量PCR结果表明,在原始造血转录因子1mo2、scl中,实验组从9hpf^24hpf较另外两组间明显减低;在定向造血转录因子中,c-myb实验组从12 hpf^24 hpf较另外两组间明显减低,runxl实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低;髓系造血转录因子pu.1和红系造血转录调控因子gata-1实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低,且差异有统计学意义。结论 Irx5a基因在斑马鱼原始造血、成体造血、红系造血、髓系造血的重要转录调控因子中发挥着抑制作用。 金璐 李燕 李志操 吴西军 周艳华 何志旭 舒莉萍关键词:斑马鱼 吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响 被引量:5 2017年 目的研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响。方法实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组。将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5~1.5h(0.5~1.5hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化。统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC_(50)的数值;统计48hpf和72hpf的胚胎孵化率及120hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量。结果计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC_(50)为16.18μmol/L。与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P<0.05)。结论吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P>0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型。 胡荣英 舒莉萍 何志旭 孙琮杰 李志操 金璐关键词:斑马鱼 吉非替尼 发育毒性 带abcb4的转基因斑马鱼系及其建立方法 本发明公开了一种转基因斑马鱼系及其建立方法,该转基因斑马鱼系是以不改变斑马鱼abcb4基因表达为前提,而通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)监测abcb4基因表达变化情况的转基因斑马鱼系。即该转基因斑马鱼系是以abcb4基... 舒莉萍 何志旭 孙琮杰 胡荣英 金璐 何思佳 吴西军文献传递 基于联烯片段的黄酮类衍生物设计、合成及其生物活性研究 目的:黄酮是植物中普遍存在的多酚类化合物。由于其具有较好的药理和治疗活性,是人们研究最多的植物化学物质之一。然而,由于其生物利用度较差(常低于5%),大多数黄酮类化合物未被开发为临床药物,通过对黄酮进行结构修饰或改造是改... 金璐关键词:黄酮 抗肿瘤活性 文献传递 长春碱增加班马鱼肿瘤耐药基因abcb4的表达 被引量:5 2017年 目的通过研究长春碱(VBL)对斑马鱼早期发育过程中abcb4肿瘤耐药基因表达的影响,为进一步建立抗肿瘤药物多药耐药筛选的斑马鱼模型奠定重要的实验基础。方法将长春碱稀释成不同浓度梯度的药液,在受精后0.5~1.5 h的斑马鱼胚胎上完成药物暴露实验,计算出长春碱IC_(50)的数值。设置长春碱为实验组,胚胎培养液为空白对照组,分别作用于受精后0.5~1.5 h的斑马鱼胚胎,观察受精后24~120 h的斑马鱼胚胎发育情况,记录死亡、孵化及畸形的胚胎数目;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR和胚胎整体原位杂交的方法,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量。结果计算出长春碱在斑马鱼胚胎中的IC_(50)为3.08μmol/L;与对照组比较,实验组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平明显升高(P<0.05);通过胚胎整体原位杂交的方法,在受精后120 h斑马鱼胚胎的小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且实验组斑马鱼胚胎在脑和心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号。结论长春碱能明显增加斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平,提示使用斑马鱼可以复制肿瘤耐药模型。 胡荣英 孙琮杰 金璐 何思佳 周艳华 舒莉萍 何志旭关键词:斑马鱼 长春碱 多药耐药 基于联烯片段的黄酮衍生物的设计、合成及抗菌活性研究 2018年 通过有机合成的手段合成了12个新的未保护的黄酮衍生物。该类衍生物是由天然黄酮与酯基联烯进行选择性分子加成,使联烯和黄酮羟基之间形成了C(sp2)—O键得到的。利用1 H NMR,13 C NMR,NOE和MS确定了目标化合物结构。通过96孔板法测定金黄色葡萄球菌(25923)、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、MrSA的MIC值,其MIC值均大于128μg/mL。上述研究结果将为制备具有药用潜力的黄酮衍生物提供理论基础。 金璐 金璐 曾雪怡 任海 陈超 任海关键词:黄酮 抗菌活性 Irx5a基因过表达对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响 目的:本研究通过在新型模式生物斑马鱼胚胎中过表达Irx5a基因,以探讨Irx5a基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法:于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFP mRNA斑马鱼胚胎作为实验组... 金璐 李燕 李志操 吴西军 周艳华 何志旭 舒莉萍关键词:斑马鱼 文献传递 Irx5a基因过表达对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响 目的 本研究通过在新型模式生物斑马鱼胚胎中过表达Irx5a基因,以探讨Irx5a基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响.方法 于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFP mRNA斑马鱼胚胎作为实验组... 金璐 李燕 李志操 吴西军 周艳华 何志旭 舒莉萍关键词:斑马鱼 带abcb4的转基因斑马鱼系及其建立方法 本发明公开了一种转基因斑马鱼系及其建立方法,该转基因斑马鱼系是以不改变斑马鱼abcb4基因表达为前提,而通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)监测abcb4基因表达变化情况的转基因斑马鱼系。即该转基因斑马鱼系是以abcb4基... 舒莉萍 何志旭 孙琮杰 胡荣英 金璐 何思佳 吴西军文献传递