孟坤
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- AAMDC激活mTOR通路促进肝细胞癌转移
- 2023年
- 目的:探讨脂肪形成相关Mth938结构域蛋白(AAMDC)在肝细胞癌(HCC)中的表达、临床意义及生物学功能。方法:通过免疫组化、肿瘤数据库分析AAMDC在HCC中的表达丰度、临床病理特点及患者预后的相关性;使用qRT-PCR和Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中AAMDC的mRNA和蛋白表达;使用Transwell等实验检测AAMDC对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响;通过免疫荧光确定AAMDC在HCC细胞的定位;通过Co-IP和高效液相质谱联用绘制AAMDC的相互作用蛋白质网络;采用转录组测序揭示AAMDC调控HCC的细胞通路。结果:AAMDC在HCC组织中高表达,与患者不良的无病生存期相关。AAMDC在HCC细胞中的mRNA和蛋白质表达水平显著高于正常肝细胞。过表达AAMDC促进HCC细胞迁移和侵袭能力,敲低AAMDC则具有相反效应。免疫共沉淀联合高效液相质谱结果显示AAMDC和脂肪酸合成酶FASN相互作用。转录组测序和体外实验显示过表达AAMDC激活mTOR通路。结论:AAMDC在HCC中表达上调,通过与脂肪酸合成酶FASN相互作用,激活mTOR信号通路,进而促进HCC侵袭转移,发挥癌基因功能。
- 周宣辰胡丽玲李钰莹石富金郑丹丹施心雨张志毅孟坤田秋红
- 关键词：肝细胞癌MTOR信号通路
- 基于C6流式细胞仪平台应用FRET技术在活细胞中研究蛋白质相互作用被引量：1
- 2017年
- 荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)的发展与应用,FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中蛋白质相互作用,还可以进行定量统计分析。由于流式细胞仪价格昂贵、FRET技术对荧光基团发光光谱的特殊要求等原因,目前为止FACS-FRET技术仅仅被应用到一些特殊的科学研究。为了解决这些问题,构建了一对新的FRET荧光基团EGFP-m Cherry,并且在小型流式细胞仪C6上检测了EGFP-m Cherry融合蛋白的FRET信号,最后使用已明确有相互作用关系的p53蛋白和MDM2蛋白做验证,证明了所构建的EGFPm Cherry可以作为检测FRET信号的荧光基团。不仅促进了FACS-FRET技术的发展,还为人类疾病治疗的药物作用靶点研究提供了有利的研究手段。
- 孟坤何庆瑜王通卢少华
- 关键词：荧光共振能量转移流式细胞术活细胞蛋白质相互作用
