孙芳
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：北京市科技新星计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组溶瘤流感病毒制备方法和应用
- 本发明公开了重组溶瘤流感病毒制备方法和应用。本发明提供的重组溶瘤流感病毒，表达HTRP1与HTRP2；HTRP1为：A1)序列1所示蛋白质；A2)在序列1中经过取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基、由A1)衍生的蛋白...
- 杨鹏辉王希良张绍庚任天宇张培瑞王兆海孙芳
- 流感病毒为载体重组病毒株rHCV/FLU的构建及初步评价被引量：1
- 2016年
- 目的构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株r HCV/FLU并对其进行评价。方法利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,构建重组质粒p NS1-HCV,测序正确的重组质粒p NS1-HCV与PR8的7个重组质粒p HW191-PB2、p HW192-PB1、p HW193-PA、p HW194-HA、p HW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M转染共培养的COS-1和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株,命名为r HCV/FLU,并通过血凝试验、RT-PCR、Western blot、电镜观察病毒形态等方法对重组病毒鉴定。接着,重组病毒接种SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化。纯化获得的重组病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0 d、14 d免疫2次,设置104TCID50、105TCID50、106TCID503个剂量组,初步评价其免疫效果。结果成功拯救重组病毒株r HCV/FLU,血凝效价(HA)为29-10,病毒滴度Log10(TCID50/ml)为6.5。滴鼻免疫小鼠二免后14 d取小鼠血清及脾淋巴细胞,3个剂量组针对流感病毒的血抑(HI)效价均值分别为80、640和1 280,初步证明重组病毒株r HCV/FLU在小鼠体内能够产生较强体液免疫和细胞免疫应答反应。结论成功制备的重组病毒株r HCV/FLU在动物体内具有较好的免疫效果,为新型HCV疫苗的研制提供新的研究策略。
- 孙芳胡雪凇任天宇段跃强王希良张绍庚杨鹏辉
- 关键词：反向遗传学丙型肝炎病毒重组病毒
- 重组溶瘤流感病毒制备方法和应用
- 本发明公开了重组溶瘤流感病毒制备方法和应用。本发明提供的重组溶瘤流感病毒，表达HTRP1与HTRP2；HTRP1为：A1)序列1所示蛋白质；A2)在序列1中经过取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基、由A1)衍生的蛋白...
- 杨鹏辉王希良张绍庚任天宇张培瑞王兆海孙芳
- 文献传递
- 两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究被引量：2
- 2018年
- 目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。
- 周珊珊杨晓岚杨晓岚孙芳谷宏婧段跃强段跃强杨鹏辉
- 关键词：反向遗传学流感病毒
- 重组溶瘤流感病毒靶向杀伤肝癌细胞的实验研究
- 2017年
- 目的拯救获得重组溶瘤流感病毒株rFlu △ NS/HCC,对其全面鉴定并评价特异性杀伤肝癌细胞的效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将NS基因部分敲除,构建重组质粒pFlu △ NS1,与流感病毒PR8的7个质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染MDCK和COS-Ⅰ细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu △ NS/HCC。重组溶瘤流感病毒株rFlu △ NS/HCC经SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化等步骤获得重组病毒,通过血凝试验、RT-PCR、电镜观察病毒形态等方法对rFlu △ NS/HCC进行全面鉴定,并通过MTS细胞活力测定、细胞病变检测评价重组溶瘤流感病毒对不同类型肝癌细胞系的杀伤效果。结果成功拯救重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC,血凝效价为2^(9^10),在HpG2细胞上感染病毒滴度log10TCID50/ml为6.5。MTS和结晶紫染色检测结果显示,重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC感染复数(multiplicity of infection,MOI)≥1时,能够显著降低HepG2细胞活力(P均<0.05);MOI≥3时,对SMMC-7721细胞活力影响达显著水平(P均<0.05);而不同MOI值的rFlu △ NS/HCC对正常细胞L02无明显影响。结论重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC能靶向杀伤肝癌细胞,有望为临床肝癌靶向治疗提供新的治疗策略。
- 孙芳任天宇严锦段跃强王希良张绍庚杨鹏辉
- 关键词：流感病毒溶瘤病毒肝癌细胞
