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mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定被引量：1: 2014年; 目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。; 楚鹰王亭亭芮昱文宋思维苏艾荣程林宋红勇郑大同吴稚伟; 关键词：人免疫缺陷病毒1型融合蛋白

中国HIV-1B'亚型流行株gp120蛋白的表达与纯化被引量：1: 2013年; 目的:表达纯化中国HIV-1 B'亚型流行株gp120蛋白。方法:将gp120基因克隆至真核表达载体pTriEx-3 hygro,构建真核表达质粒pTriEx-3-gp120,转染CHO-K1细胞,96 h后收取上清,利用金属螯合层析的方法纯化该重组蛋白,并通过SDS-PAGE以及Western blotting验证重组蛋白的表达。结果:酶切及测序结果表明真核质粒表达构建正确,表达的重组蛋白可以被His标签抗体以及HIV-1阳性血清所识别,并从细胞转染上清中成功纯化了该蛋白。结论:我们成功构建了一个可用于免疫检测、疫苗设计以及其它相关研究的HIV-1免疫原。; 楚鹰宋红勇吴稚伟; 关键词：HIV-1 GP120 蛋白表达纯化

中国HIV-1感染者中和抗体反应以及靶位分析: 许多研究表明，HIV-1感染者体内可以产生中和抗体。HIV-1病毒表面的囊膜蛋白是中和抗体的主要靶点，中和抗体表位主要位于gp120以及gp41的膜外部分。迄今为止，对于中和抗体表位及其结构的知识主要来自对欧美流行的HI...; 楚鹰; 关键词：HIV-1病毒感染者

SAG结构域N-SRCR的表达和纯化: 唾液凝集素SAG是唾液中的一种分子量约为340 kD的高度糖基化的蛋白,属于SRCR超家族成员,在先天免疫中起重要作用.已证实SAG可与多种细菌结合,使细菌凝集而抑制感染.数据显示,HIV-1经口腔感染很罕见,体外实验表...; 贺欣楚鹰吴稚伟; 关键词：表达纯化抗HIV-1; 文献传递

HIV-1膜蛋白GP120V1/V2区域的真核表达、纯化和鉴定被引量：3: 2012年; 目的:真核表达北美HIV-1分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2,并纯化、鉴定其生物活性,为血清学分析鉴别HIV-1感染病人抗体反应及性质提供实验基础。方法:本研究将HIV-1北美分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2基因序列定向克隆到多系统表达载体pTriEx-3 Hygro vector(Merck&Co.,Inc.)中,构建了表达质粒,并将表达质粒瞬时转染293T细胞,144小时后收获上清液,经浓缩、纯化后,SDS-PAGE电泳,Western blot检测蛋白的表达,ELISA检测其与HIV-1阳性病人血清的反应性。结果:经SDS-PAGE电泳、Western blot、ELISA方法证实确实得到了有免疫反应活性的V1V2蛋白,从表观分子量判断,表达的V1V2蛋白被糖基化修饰。使用V1V2蛋白作为抗原,分析发现中国HIV-1阳性病人体内比较广泛的存在着V1V2的抗体,为血清学的分析奠定了实验基础。; 宋红勇楚鹰吴稚伟; 关键词：HIV-1 真核表达

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楚鹰