王继明
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津医科大学眼科临床学院更多>>
- 发文基金：天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导色素上皮衍生因子基因转染人脐带间充质干细胞研究
- 2017年
- 目的构建携带色素上皮衍生因子（PEDF）基因的慢病毒（LV）载体并转染人脐带间充质干细胞（hUCMSCs），初步探讨基因修饰PEDF-间充质干细胞的可行性。方法采用基因重组方法构建LV-PEDF载体，测定其LV滴度，以感染复数（MOI）值为10、30、50 的LV体外转染hUCMSCs，并据此分为相应MOI值实验组；以不含PEDF基因的相同MOI值的重组LV载体[LV-绿色荧光蛋白（GFP）]转染hUCMSCs，并据此分为 相应MOI值对照组。荧光显微镜观察两组细胞转染效率并计算转染率。采用细胞免疫荧光法、免疫细胞化学法、实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF、血管内皮生长因子（VEGF） 表达水平。结果经酶切以及基因测序鉴定证明LV载体构建成功。转染96 h后，50MOI实验组细胞可见大量GFP表达，转染效率为72.1%。荧光显微镜观察发现，转染后96 h，50MOI实验组细胞胞浆PEDF、VEGF表达增强。光学显微镜观察发现，转染后96 h，50MOI实验组细胞胞浆PEDF表达较低，而VEGF表达较强。RT-PCR检测结果发现，50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF mRNA相对表达量分别为0.170±0.028、0.015±0.007；VEGF mRNA相对表达量分别为0.265±0.022、0.285±0.049。两组细胞中PEDF mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（F=70.29，P＜0.001）；VEGF mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（F=9.57，P＞0.05）。结论成功构建携带PEDF基因LV表达载体，并在hUCMSCs中过表达PEDF基因。
- 段红涛陈松董蒙王月欣孔佳慧宋建李泽东王继明
- 关键词：血管内皮生长因子类间充质干细胞慢病毒感染
- 人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究人脐带分离的间充质干细胞(UC-MSC)在体外分离、培养、扩增和鉴定以及向神经干细胞和神经元细胞分化的可能性,为临床治疗糖尿病视网膜病变(DR)神经损伤提供理论基础。方法选用足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带,剔除动静脉后采用贴壁法分离得到UC-MSC,选用20%FBS血清培养液进行原代培养,经传代培养、流式细胞检测后,用神经分化培养基诱导UC-MSC分别向神经干细胞和神经元细胞分化,在荧光显微镜下观察细胞形态,并以免疫荧光和RT-PCR方法进行鉴定。结果 UC-MSC呈贴壁生长,倒置显微镜可见细胞呈形态相对均一的梭形细胞,呈放射状排列生长或旋涡状生长。流式细胞检测表明这些细胞表达CD105(SH2)、CD73(SH3)及CD90等MSC标志物;不表达CD34、CD45、CD11b和CD19。经神经干细胞分化诱导后,细胞开始聚集形成大小不等的细胞簇形成悬浮的细胞团;RT-PCR及免疫荧光检测表明,其NSE和Neuro D1阳性细胞分别达(87.3±14.7)%、(72.6±11.8)%。经神经元细胞分化诱导后,细胞呈神经元样的突起,细胞胞体饱满、折光性明显变强;RT-PCR及免疫荧光检测表明,其MAP2和NF-M阳性细胞分别达(43.1±10.3)%、(69.4±19.5)%。结论在一定的诱导条件下,UC-MSC能向神经细胞分化,可能作为DR神经损伤的细胞移植治疗来源。
- 张惟陈松王继明段红涛孔佳慧王月欣董蒙毕雪宋建
- 关键词：脐带间充质干细胞神经干细胞神经元糖尿病视网膜病变
