刘娟华
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定
- 2020年
- 旨在制备禽致病性大肠杆菌(APEC)染色体编码外膜蛋白(cOmpT)的特异性单克隆抗体,本研究利用实验室已构建的APEC cOmpT重组表达质粒pET-28a-c ompT,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约36 ku的重组蛋白cOmpT,利用尿素浓度梯度透析复性获得纯化蛋白cOmpT,并以此免疫BALB/c小鼠。建立间接ELISA检测方法,最适抗原包被浓度为0.625μg·mL-1,最适血清稀释度为1∶6400。4次免疫后取小鼠脾进行细胞融合,采用有限稀释法多轮筛选后得到3株能稳定分泌针对cOmpT蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8、2C3和2G3,均为IgG2b亚类。3株杂交瘤细胞上清ELISA抗体效价分别为1∶200、1∶3200和1∶3200。Western blot结果显示,3株单抗均能与cOmpT发生特异性反应,而不与其他受检菌发生交叉反应。运用原核表达系统对c ompT基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的cOmpT抗原表位进行鉴定,结果显示单抗1G8、2C3和2G3识别的抗原表位分别是83 DQDWMDS 89、90 SNPGTW 95和197 TFKYSGW 203。本研究成功制备了3株抗cOmpT蛋白的单克隆抗体,并对其识别的抗原表位进行了鉴定,为cOmpT蛋白功能研究和APEC新型表位疫苗研发奠定了基础。
- 薛菲杨梓纯许炎辉王娅玲喻婷樊毛迪刘娟华高崧刘秀梵
- 关键词：禽致病性大肠杆菌单克隆抗体抗原表位
- 同一个体APEC腺胃分离株和心血分离株毒力基因及致病性比较
- 王小波高清清刘娟华吴力力高崧
- 大肠杆菌外膜蛋白酶T研究进展被引量：2
- 2019年
- 外膜蛋白酶T(Outer membrane protease T,OmpT)是大肠杆菌外膜的一种蛋白水解酶,是Omptin家族中第一个被解析结构的外膜蛋白,由10条反向平行的β折叠构成中空的桶状结构。OmpT能够识别两个连续的碱性氨基酸,并水解鱼精蛋白和血纤维蛋白溶酶原等。脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对OmpT蛋白酶功能的激活具有重要作用。研究发现,OmpT对细菌的定植和黏附至关重要。文章围绕OmpT的结构、功能、毒力等方面综述该蛋白当前的研究进展。
- 王艳刘娟华王航薛菲高清清高崧高崧
- 关键词：外膜蛋白酶学特征生物学功能
- APEC O142腺胃分离株和心血分离株在鸡体内外的表达差异基因的筛选
- 王小波高清清刘娟华吴力力高崧
- APEC O142腺胃分离株和心血分离株在鸡体内外的表达差异基因的筛选
- <正>研究目的本研究选择APEC 4d/9-1 O142腺胃分离株和心血分离株为研究对象,筛选部分潜在的新毒力基因。材料方法应用商品化大肠杆菌基因芯片对选择的致病性大肠杆菌分离株进行以SPF鸡作动物模型的体内外表达基因谱...
- 王小波高清清刘娟华吴力力高崧
- 关键词：分离株体外表达差异基因体内外
- 文献传递
- 同一个体APEC腺胃分离株和心血分离株毒力基因及致病性比较
- <正>研究目的为探明前期研究中从同一个体病死雏肉鸡（剖检病理变化以腺胃呈黑色为主要特征）腺胃分离的APEC 4d/9-1 O142菌株和APEC 4d/9-1 O142心血分离株是否为相同菌株及评价两者对动物的致病性。材...
- 王小波高清清刘娟华吴力力高崧
- 关键词：分离株毒力基因
- 文献传递
- kpsE和kpsD双基因缺失显著降低肠道外致病性大肠杆菌的毒力被引量：4
- 2016年
- 【目的】探究荚膜对肠道外致病性大肠杆菌致病作用的影响。【方法】选取负责荚膜多糖转运的基因kpsE和kpsD,利用λRed重组系统构建APEC E058和UPEC U17荚膜缺失株E058ΔkpsED和U17ΔkpsED,并通过一系列的体内及体外试验对其生物学特性及致病性进行研究。【结果】双基因缺失株的生长速度较野生株没有明显差异,但缺失株抗血清补体杀菌能力和抗鸡巨噬细胞HD-11细胞吞噬能力显著下降。1日龄雏鸡LD50致病性试验结果显示,缺失株E058ΔkpsED和U17ΔkpsED对鸡失去致病力,而回复株毒力恢复至野生株水平;35日龄SPF鸡体内动态分布和竞争试验显示ΔkpsED缺失株在鸡体内定殖能力和竞争性生长能力显著下降,表明kpsED双基因的缺失能显著降低APEC E058和UPEC U17的致病力。【结论】荚膜与肠道外致病性大肠杆菌的致病性相关,是其重要的毒力因子。
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- 关键词：荚膜致病力
