李羚
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生长因子受体结合蛋白10与糖尿病
- 2009年
- 李羚贾伟平王琛
- 关键词：生长因子受体结合蛋白基因敲除技术生长发育障碍PROTEIN单核苷酸多态性
- 胰岛B细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型的制备
- 2015年
- 目的制备胰岛B细胞特异性APPL1(adaptor protein containing PH domain,PTB domain and Leucine zipper motif 1)基因敲除小鼠模型(B-APPL1KO)。方法采用基因剔除打靶技术,胚胎干细胞(ES)基因打靶,囊胚显微注射法制备嵌合小鼠,嵌合小鼠与野生型C57BL/6J雌性小鼠繁殖APPL1-flox杂合子(APPL1flox/+)小鼠,APPL1-flox纯合子(APPL1flox/flox)小鼠由APPL1flox/+小鼠相互交配获得。利用Cre-LoxP系统繁育B-APPL1KO小鼠。繁育小鼠经尾端裂解提取DNA鉴定基因型,采用Western印迹法检测APPL1蛋白表达水平。结果 APPL1flox/flox和B-APPL1KO小鼠繁育成功。APPL1flox/flox小鼠胰岛组织有APPL1表达,而B-APPL1KO小鼠则无APPL1表达。APPL1flox/flox和B-APPL1KO小鼠的脂肪组织均有APPL1蛋白表达。与APPL1flox/flox小鼠相比,B-APPL1KO小鼠的体重有增加的趋势,但两者间各时间点的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。两者间8、10周龄的空腹血糖和10周龄的空腹胰岛素水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论胰岛B细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型制备成功,为探讨APPL1在胰岛中的功能提供研究工具。
- 李晓雯李羚林紫薇孙赟陈辰王琛贾伟平
- 关键词：胰岛B细胞
- APPL1对高糖及炎症因子诱导的胰岛β细胞凋亡和功能损伤的保护作用被引量：2
- 2013年
- 目的 明确适配蛋白APPL1在胰岛β细胞中的作用。方法 采用腺病毒转染使INS-1细胞过表达APPL1。Western印迹法检测蛋白表达水平，碘化丙啶/Hoechst染色法检测细胞凋亡，用ELISA检测胰岛素分泌。结果 20 mmol/L葡萄糖或30 U/ml白细胞介素-1β加20 ng/ml TNF-α作用INS-1细胞48 h后，可明显诱导胰岛β细胞凋亡（P〈0.01），并降低2 h葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平（P〈0.01）。INS-1细胞过表达APPL1后，与各自的对照病毒组相比，APPL1可使细胞凋亡降低34.16%～42.79%（P〈0.01），并使葡萄糖刺激的胰岛素分泌升高至对照组的1.39～2.20倍（P〈0.05）。结论 APPL1对高糖和炎症因子诱导的胰岛β细胞损伤具有保护作用，可降低β细胞凋亡并改善葡萄糖刺激的胰岛素分泌。
- 王士洪李晓雯李羚慕开达王琛贾伟平
- 关键词：细胞凋亡胰岛素分泌
- 应用高葡萄糖钳夹技术评估高糖喂养小鼠胰岛细胞功能被引量：1
- 2011年
- 目的利用高葡萄糖钳夹技术探讨高糖喂养小鼠胰岛B细胞功能。方法将16只4周龄C57BL／6J品系小鼠随机数字表法分为2组（各8只），分别用高糖与普通饲料喂养，8周后行腹腔葡萄糖耐量实验比较2组小鼠葡萄糖耐量，行胰岛素耐量实验比较2组小鼠外周组织对胰岛素的敏感性，应用高葡萄糖钳夹技术比较模型小鼠在体胰岛β细胞第1时相和第2时相胰岛素分泌改变。钳夹实验结束3～4d后麻醉动物，取小鼠肝脏，利用庚烷-异丙醇-吐温的方法提取肝脏内甘油三酯及总胆固醇。组间数据比较采用t检验。结果喂养10周时，高糖组小鼠体质量[（18．0±0．8）g]低于普食组[（23．6±0．5）g]，2组差异有统计学意义（扭5．595，P〈0．05）。高糖组糖耐量曲线下面积为（103±3）mmol／L，显著高于普食组的（91±3）mmol／L（t=2．487，P〈0．05）。普食组葡萄糖利用指数（KITT）与高糖组差异无统计学意义（分别为0．53±0．08和0．54±0．14，t=2．360，P〉0．05）。高葡萄糖钳夹显示，高糖组第1时相胰岛素水平较普食组下降了49．6％[分别为（0．71±0．26）和（I．41±0．44）μg/L；t=2．943，P〈0．05]；高糖组平均葡萄糖输注率为（6．8±2．2）mg·kg-1·min-1，也较普食组的（20．2±2．3）mg·kg-1·min-1降低了66．3％（t=4．206，P〈0．05）。结论高糖喂养早期（8周），小鼠发生葡萄糖耐量降低，主要为胰岛β细胞第1时相胰岛素分泌减弱所致，并非外周胰岛素敏感性改变引起。
- 张明亮朱云霞尹德超李羚陆俊茜王琛贾伟平
- 关键词：糖尿病小鼠胰岛Β细胞
- 流式细胞仪分选大鼠胰岛β细胞方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 目的:应用流式细胞仪(FCM)结合侧向角散射光(SSC)和细胞自发荧光强度分选大鼠胰岛β细胞。方法:选取正常雄性SD大鼠,胶原酶消化显微镜下手捡纯化胰岛。胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液。依据细胞自发荧光强度和SSC的差异通过流式细胞仪进行细胞分选。细胞存活率用PI/HO双染法鉴定,β细胞的纯度用细胞免疫组化鉴定。胰岛素测定采用酶联免疫吸附法。结果:自发荧光强度和SSC均高的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(94.5±0.95)%,较分选前单细胞中胰岛素染色阳性细胞百分比(81.2±1.12)%增高,为β细胞富集群;自发荧光强度和SSC均较低的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(10.0±0.82)%,为non-β细胞群。分选出的β细胞群死亡率低(<5%),其胰岛素分泌随葡萄糖刺激浓度的增加而增加(r=0.8,P<0.001),其中葡萄糖浓度在20 mmol/L时β细胞分泌的胰岛素明显大于浓度为2.8 mmol/L时的分泌量(P<0.001)。此外,Forskolin(FK)和Exendin-4(EX4)可以显著增强β细胞胰岛素的分泌(PFK<0.001,PEX4<0.05)。结论:根据β细胞自发荧光和SSC与non-β细胞的差异进行纯化的β细胞死亡率低、纯度高,胰岛素分泌功能较好,是一种值得推广的分选β细胞的方法。
- 尹德超李羚张明亮李晓雯王士洪幕开达王琛贾伟平
- 关键词：胰岛Β细胞流式细胞仪
