沙文琼
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体的纯化与复性研究被引量：12
- 2005年
- 目的纯化、复性大肠杆菌表达的vMIPⅡ包涵体蛋白。方法用8molL尿素缓冲液变性溶解vMIPⅡ包涵体,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)进一步促溶,利用金属亲和层析和分子筛层析纯化,再利用柱层析去除SDS,纯化后透析复性;通过荧光和单核淋巴细胞趋化抑制实验检测复性蛋白的结构和抑制单核淋巴细胞趋化的活性。结果重组vMIPⅡ纯化和复性后,仍具有完整的高级结构和抑制单核细胞趋化的活性。结论已获得了重组vMIPⅡ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础。
- 张少恩孙晗笑张光杨清玲沙文琼刘俊云龚莉桂
- 关键词：大肠杆菌表达复性包涵体蛋白层析纯化活性蛋白趋化
- 人胎盘间充质干细胞的超微结构及其吞噬功能被引量：4
- 2015年
- 背景:胎盘间充质干细胞组织来源丰富,与骨髓间充质干细胞有着类似的形态、表面标记物、潜在分化能力,是人体理想的间充质干细胞来源之一。目前对胎盘间充质干细胞超微结构和吞噬功能的研究较少,对其在胎盘组织中的生理功能也鲜有探讨。目的:了解胎盘间充质干细胞的超微结构和吞噬功能。方法:分离培养5个正常娩出胎盘来源的胎盘间充质干细胞,经体外培养后在透射电子显微镜下观察细胞的超微结构;在培养上清中添加荧光微球,孵育3 h后用流式细胞仪检测细胞的吞噬能力。结果与结论:胎盘间充质干细胞在透射电镜下表现为细胞核比较大,核仁明显;核膜折叠、内陷显著,常染色质多,核浆比例正常。内质网系统发达,可见大量狭小或扩张的粗面内质网。胞浆内高尔基器、溶酶体常见;细胞表面微绒毛发达,偶可见细胞间连接。5个标本的胎盘间充质干细胞中均有部分细胞能吞噬荧光微球,最多有49.6%,最少有18.4%。上述胎盘间充质干细胞的超微结构特点提示细胞功能活跃,可合成和分泌大量蛋白质,并具有吞噬功能;而吞噬实验进一步验证胎盘间充质干细胞吞噬异物的能力,提示胎盘间充质干细胞在胎盘中可能起着维持微环境稳态、清除异物的功能。
- 沙文琼折瑞莲王自能柯茹
- 关键词：干细胞人胎盘间充质干细胞超微结构
- 重组病毒巨噬细胞炎性蛋白对HIV-1_(SF1)的体外抑制作用被引量：4
- 2005年
- 目的:研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(rvMIP)体外的抗HIV-1SF1作用效果和机制。方法:分别在HIV-1SF1接种前后将敏感的MT-4细胞系与rvMIP作用,检测MT-4细胞系病变情况和培养上清的P24抗原水平,用有限稀释PCR法测定前病毒DNA水平。结果:预先用rvMIP处理过的细胞,病毒感染后细胞病变程度很轻,培养上清的P24抗原和前病毒水平明显低于对照组,P24抗原抑制率可达90%;先感染病毒再用rvMIP处理组病毒P24抗原水平和细胞内前病毒DNA水平也显著降低,但降低程度不如先用rvMIP预处理组。结论:rvMIP能阻止病毒进入靶细胞,同时可能也通过某种机制抑制已感染细胞HIV病毒的复制。
- 沙文琼孙晗笑张光莫雪梅郭钦丽
- 关键词：巨噬细胞炎性蛋白体外抑制作用P24抗原DNA水平病毒感染后抗原水平
- 子痫前期患者胎盘间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖的研究被引量：1
- 2015年
- 目的纯化和体外培养子痫前期患者的胎盘间充质干细胞(p MSCs),研究子痫前期患者p MSCs的免疫抑制能力。方法从子痫前期患者及正常妊娠者胎盘组织中纯化培养p MSCs,应用Transwell板将p MSCs与混合淋巴细胞共培养,检测淋巴细胞数,计算淋巴细胞增殖抑制率。在培养基中加入干扰素γ,分别从mRNA水平和蛋白质水平检测p MSCs的吲哚胺双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达水平。结果来源于子痫前期患者的PMSCs和正常妊娠者的形态相同,表达CD44、CD29、CD73、CD90、CD105、HLA-I类分子,极少表达CD34、CD45、CD14及HLA-Ⅱ分子。能够在体外被诱导分化为成骨细胞及成脂细胞。细胞释放的可溶性分子具有抑制淋巴细胞增殖的作用;细胞表达低水平的IDO,但当受到IFN-γ刺激后,表达水平显著提高(P<0.05)。对照正常妊娠组和子痫前期组p MSCs对淋巴细胞增殖的抑制率和表达IDO水平,差异均不具有显著性(P>0.05)。结论 p MSCs所表达的IDO和释放的可溶性分子可能与PE的发生、发展无关;由于现有体外培养技术不能反映p MSCs在体内的状态,也可能导致原本存在的差异难以体现出来。
- 沙文琼折瑞莲柯茹王硕石
- 关键词：子痫前期胎盘间充质干细胞成骨诱导分化混合淋巴细胞反应
- 人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化被引量：9
- 2010年
- 背景:胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞。目的:拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质干细胞的操作方案。方法:人胎盘组织洗净剪碎,采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化,分3个阶段,每个阶段在恒温37℃下180r/min消化2min。重悬消化产物,200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离,分别收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层。滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞,胎盘间充质干细胞直接接种于75cm2培养瓶中培养。观察胎盘组织消化情况,计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达,观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能。结果与结论:经胰蛋白酶和DNAseⅠ消化后,胎盘组织仅剩少许残渣。差速贴壁后,滋养细胞数达(5.48±1.98)×108个,细胞角蛋白7阳性率为(90±4.36)%。胎盘间充质干细胞接种19～21d达90%融合,细胞数为(1.96±0.24)×106个,强表达CD29,CD44和HLA-ABC,不表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,诱导后茜素红染色呈鲜艳橙红色,可向成骨细胞方向分化。提示采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化胎盘组织,并结合Percoll不连续密度梯度分离液分离细胞,可同时一次性获得大量的滋养细胞和较多的胎盘间充质干细胞,细胞纯度和活性均较好。
- 沙文琼王自能王冬菊
- 关键词：胎盘组织滋养细胞PERCOLL胎盘间充质干细胞
- SIVmac在细胞间的直接播散和重组vMIP对其影响的初步研究
- 目的：目前艾滋病毒新的感染机制已经引起人们的广泛关注。除了游离的感染性病毒颗粒进入细胞外,HIV还可以通过细胞与细胞的直接接触播散并诱导宿主细胞形成感染性突触。猴免疫缺陷病毒(SIV)为猴艾滋病的病原体,在许多方面与HI...
- 沙文琼
- 关键词：CD4CCR5
- 文献传递
- 广州4194份脐带血HLA-A、B、DRB1等位基因型和单倍型频率研究
- 2008年
- 目的对广州脐血库10年来保存的脐血人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）等位基因及单倍型分布特征进行分析。方法采用单克隆板，序列特异引物聚合酶链反应，PCR序列特异性寡核苷酸探针和DNA测序分型方法对广州脐血库内4194份脐带血进行mA-A、B、DRB1等位基因分型。用Arlequin软件计算HLA基因频率和单倍型频率。结果在广州脐血库中，mA．A、B、DRB1等位基因型分别有18，43，13种。累积频率〉50％的显著高频率等位基因是：A＊11，A＊02，A＊24，A＊33，B＊40，B＊15，B＊46，B＊13，DRB1＊12，DRB1＊15，DRB1＊09，DRBl＊04；最常见的单倍型为：A2-B46、B6-DR9、A11-DR12、A2-B6-D1L9。结论广州脐血库脐血捐献者mA．A、B、DRBl等位基因型及单倍型分布具有典型南方人群的特点，此资料有助于为临床移植寻找合适匹配的供受对。
- 沙文琼廖灿李焱杨昕汤雪薇黄以宁谢杏梅
- 关键词：脐血库单倍型
- 人胎盘间充质干细胞的纯化方案及其生物学特性研究
- 第一章人胎盘间充质干细胞分离与纯化方案的建立
目的:一次性消化较大量胎盘组织,建立从胎盘组织中大量、高效的分离纯化出人胎盘间充质干细胞(human placental mesenchymal stem cell,h...
- 沙文琼
- 文献传递
- 剖宫产手术不影响孕鼠体内骨髓间充质干细胞的归巢
- 2018年
- 背景:剖宫产术后远期并发症(前置胎盘、胎盘植入、瘢痕处妊娠、子宫破裂)危及孕产妇生命,剖宫产术切口瘢痕处的子宫内膜及平滑肌缺损、蜕膜形成不良可能是主要病因。间充质干细胞具有修复组织损伤的功能,归巢于损伤部位的细胞量有可能影响组织修复的效果。目的:在大鼠剖宫产手术模型中探讨间充质干细胞输入后在体内的分布、归巢情况。方法:体外分离雄性大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定。取雌性Wistar大鼠随机分为2组:剖宫产手术组大鼠于受孕第21天进行剖宫产术,术后即时经尾静脉注射制备好的雄性大鼠间充质干细胞;对照组大鼠自然分娩后即注射等量雄性大鼠间充质干细胞。分别于注射后第7,28天处死大鼠,通过SRY-PCR技术检测其心、肺、肝、肾、以及子宫瘢痕组织中SRY基因含量,间接反映组织中雄性大鼠骨髓间充质干细胞的存留量及相对分布水平。结果与结论:剖宫产手术组细胞注射后第7天,SRY基因在肺组织中含量最高,其次是肝,在肾组织中也有一定量的分布,而在心脏和子宫瘢痕处的SRY基因含量较少;注射后第28天SRY基因在肺、肝和肾中的含量均有一定程度的下降(P<0.05),而在心脏和子宫瘢痕处,SRY基因的含量未见显著变化(P>0.05)。非手术对照组注射后第7,28天SRY基因的检测结果和剖宫产手术组基本一致,心脏和子宫组织的SRY基因含量均较低。结果提示:异体骨髓间充质干细胞进入大鼠体内主要分部于血流丰富的肺、肝、肾组织,并且随着时间干细胞量逐渐减少;心脏和子宫组织中的骨髓间充质干细胞数量较少,随时间变化不明显。剖宫产手术损伤并没有影响骨髓间充质干细胞在孕鼠体内的分布,也没有增加骨髓间充质干细胞在子宫手术瘢痕处的归巢和定植。
- 沙文琼折瑞莲王硕石王倩许曼石苇李岚
- 关键词：间质干细胞移植基因SRY干细胞骨髓间充质干细胞归巢SRY基因
- vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达的影响被引量：1
- 2006年
- 目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞TCRVβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个TCRVβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞TCRVβ7亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性。结果与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个TCRVβ亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中TCRVβ亚家族的表达量上升更加明显。基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势。结论体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变。vMIP-Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生。
- 郭钦丽王峰沙文琼莫雪梅李秀英许华张光孙晗笑
- 关键词：TCRVΒRT-PCR基因扫描
