张可昕
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱被引量：5
- 2017年
- 目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱。结果比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。结论利用MALDI-TOF MS技术和Bio Explorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值。
- 麻雅婷杨明何赏陈琛张可昕王成彬
- 关键词：大肠埃希菌
- 基于核酸质谱技术快速鉴定常见血流感染病原菌
- 目的: 1.应用基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI...
- 张可昕
- 经小鼠尾静脉注射诱导肺炎克雷伯菌血流感染模型的建立及评价被引量：5
- 2017年
- 目的建立可靠的肺炎克雷伯菌血流感染模型,为细菌性血流感染早期诊断相关研究提供可靠的依据。方法选择肺炎克雷伯菌标准株ATCC 700603为实验菌株,将不同浓度的细菌悬液通过尾静脉注入小鼠体内,按Karber法计算LD50,以1/2LD50浓度注射小鼠,通过其体征变化、体重变化、血培养、分子生物学试验、H·E染色等指标综合评价模型,验证造模效果。结果小鼠LD50为1.11×109 CFU/ml,菌液感染小鼠1h后开始出现立毛,活动减少;感染前体重为(33.60±1.21)g,注射菌液后1天内体重下降至(28.86±1.42)g,跟对照组比较有明显差别(P<0.05),7天后恢复正常水平(33.17±1.72)g;正常小鼠白细胞为(1.42±0.66)×109/L,注射菌液3h后升至(2.52±1.01)×109/L,6h升至(3.08±0.85)×109/L,跟对照组比较有明显差别(P<0.05),2天后白细胞进一步升至(6.88±3.11)×109/L,7天后仍无明显下降;小鼠全血培养结果表明前2天任意时间血培养结果为阳性;毒力因子引物扩增疑似菌DNA,结果表明小鼠血流感染病原菌均为肺炎克雷伯菌;注射菌液1天后小鼠肺泡明显渗出、水肿、白细胞浸润;2天后肺结构逐渐恢复,肝恢复速度较肺慢。结论建立了小鼠肺炎克雷伯菌血流感染模型,能够为血流感染的早期诊断和不同病原菌感染的鉴别诊断等研究提供了可靠的动物模型。
- 杨明麻雅婷何赏陈琛杨继勇向代军张可昕王成彬
- 关键词：肺炎克雷伯菌毒力因子聚合酶链反应
- 一种用于检测10种临床感染常见病原菌的核酸质谱方法
- 本发明公开了一种检测10种临床感染常见病原菌的引物系统。使用该检测体系，对病原菌感染患者的血液或体液(胸水，腹水，引流液，关节液，脑脊液)感染样本进行检测，检测结果结合其他临床指标，可为临床医师早期诊断，合理使用抗生素提...
- 王成彬何赏陈琛张可昕
- 文献传递
- 基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统的血流感染致病菌早期检测被引量：2
- 2018年
- 目的基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)建立早期血流感染致病菌检测体系。方法选取大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌、肺炎链球菌等10种临床最常见的病原菌作为检测对象,结合多重PCR技术和Mass ARRAY iPLEX单碱基延伸技术、MALDI-TOF MS技术,模拟细菌感染血液样本建立MALDI-TOF MS细菌核酸检测体系,测定其灵敏度;选取2017年3-5月在解放军总医院急诊科收集的疑似脓毒症患者血液样本33例对该体系进行验证,并将检测结果与微生物科血培养结果进行比较。结果本研究所建立的MALDI-TOF质谱血液致病菌检测系统可同时检测分属两组的10种细菌,所有细菌样本均可见延伸峰;灵敏度为100CFU/ml;与33例临床血培养鉴定结果的阴性符合率为100%(27/27),6例血培养阳性样品中有2例为摩氏摩根菌和人葡萄球菌感染,因这两种细菌不包含在10种检测对象之内而未能通过质谱检出,其余4例血培养阳性样品与质谱检测结果的符合率为100%。结论本研究建立的MALDI-TOF质谱检测体系可从全血样本中直接检测10种临床常见血流感染致病菌,无需进行培养,与传统血培养及生化鉴定相比具有耗时短、灵敏度高、准确度高等优势,可在一定程度上满足临床早期、快速诊断血流感染致病菌的需求。
- 张可昕胡翀陈琛何赏杨明王成彬
- 多重PCR方法快速检测血流感染10种常见病原菌方法的建立与应用被引量：11
- 2018年
- 目的应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、肺炎链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌等临床常见病原菌的快速、高效检测方法,并应用于血培养后病原菌的检测。方法以肺炎克雷伯菌khe基因、鲍氏不动杆菌OXA基因、肺炎链球菌LytA基因、屎肠球菌和粪肠球菌ddl基因、大肠埃希菌phoA基因、表皮葡萄球菌2312基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、铜绿假单胞菌ecfX基因、奇异变形杆菌ure基因序列为模板,分别设计特异性引物,建立多重PCR扩增体系并优化。收集临床血培养报阳标本200份,应用所建立的多重PCR法鉴定,并与传统血培养方法比较。结果多重PCR法可特异性扩增出10种病原菌目标DNA条带,200份报阳样本目标菌阳性预测值为60.5%,除传统血培养有1份漏检外,多重PCR与血培养法结果符合率为100%。结论多重PCR方法与传统鉴定方法相比,可大幅度缩短临床培养报阳后鉴定时间,其多种病原菌同时检测的优势,具有良好的临床应用前景。
- 胡翀胡翀马薇张可昕何赏陈琛曲芬罗燕萍
- 关键词：细菌鉴定
- LIF和RANTES在单病原菌性血流感染小鼠模型中的表达及意义被引量：3
- 2018年
- 目的探讨4种血流感染常见病原菌分别致小鼠血流感染后白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)和活化T细胞调节的、正常T细胞表达和分泌的细胞因子(regulated upon activation,normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)的表达及变化规律,为细菌性血流感染的早期诊断提供研究基础。方法建立金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌标准菌株的CD-1(ICR)小鼠血流感染模型,用蛋白质液相芯片技术检测各实验组和PBS对照组感染后0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h时LIF和RANTES的浓度。结果金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的致小鼠死亡的半数致死量(LD50)分别约为8.1×108/m L、9.6×108/m L、8.1×108/m L和1.1×109/m L。细菌入血1 h时血清中LIF的浓度明显升高,大肠埃希菌组、肺炎克雷伯菌组、金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组LIF的峰浓度分别为(51.6±5.0)pg/m L、(73.2±20.8)pg/m L、(7.3±0.9)pg/m L和(6.1±1.2)pg/m L,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。粪肠球菌组、大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组细菌入血1 h时RANTES浓度明显升高,3 h时升高更明显。且大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组升高的幅度较金黄色葡萄球菌和粪肠球菌组更为明显。达峰值时浓度分别为(1 929.0±25.2)pg/m L、(1 218.1±227.4)pg/m L、(55.7±10.0)pg/m L和(179.2±9.2)pg/m L,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论 LIF和RANTES的浓度在细菌入血后1 h即明显升高。感染后的2 d内,大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组LIF和RANTES浓度的升高幅度明显高于金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组。联合检测LIF和RANTES可能在细菌性血流感染早期诊断和区分革兰阴性/革兰阳性菌感染方面有一定作用。
- 杨明麻雅婷何赏陈琛张可昕王成彬
- 关键词：白血病抑制因子血流感染小鼠模型
- 金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌血流感染小鼠模型的建立及评价被引量：4
- 2017年
- 目的 建立临床常见的细菌性血流感染早期诊断小鼠模型,为血流感染早期标志物的寻找和验证提供稳定可靠的实验模型.方法 选择金黄色葡萄球菌ATCC25923和肺炎克雷伯菌ATCC700603为实验菌株,将不同浓度的细菌悬液通过尾静脉注入小鼠体内,按Karber法计算半数致死量（LD50）,以1/2LD50浓度注射小鼠,通过其体征、体重变化,白细胞（WBC）、血小板（PLT）、白细胞介素-6（IL-6）等指标变化,及血培养、PCR和HE染色结果等综合评价模型,验证造模效果.结果 金黄色葡萄球菌的LD50约8.1＆#215;108 CFU/ml,肺炎克雷伯菌的LD50约1.11＆#215;109 CFU/ml.小鼠感染24 h后体重明显下降.正常小鼠WBC为（1.42＆#177;0.66）＆#215;109/L,注射菌液3 h后开始升高,6 h后明显升高后下降,48 h后WBC再次升高,168 h后仍无明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P＆lt;0.05）.PLT在感染后24 h内明显下降（P＆lt;0.05）.IL-6含量在肺炎克雷伯菌感染后升高较早,且升高幅度较金黄色葡萄球菌明显.感染后48 h内小鼠全血培养结果均为阳性,PCR结果证实了血流感染病原菌为金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌.HE染色结果表明感染后肝和肺存在炎细胞浸润.结论 成功建立了金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的小鼠血流感染模型,为血流感染的早期诊断和不同病原菌感染的鉴别诊断等研究提供了可靠的动物模型.
- 杨明麻雅婷何赏陈琛张可昕李新军向代军王成彬
- 关键词：金黄色葡萄球菌肺炎克雷伯菌毒力因子
- 不同细菌所致小鼠血流感染模型中MIP-1β、MIP-2和IL-12p70的表达及变化规律被引量：3
- 2017年
- 目的探讨4种血流感染常见细菌致小鼠血流感染后MIP-1β、MIP-2和IL-12p70的表达及变化规律。方法建立金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CD-1(ICR)小鼠血流感染模型,采用Luminex液相芯片系统检测各实验组和PBS对照组小鼠感染后0.5、1、3、6、12、24和48 h MIP-1β、MIP-2和IL-12p70的含量。结果 MIP-1β的浓度在细菌入血后1 h时明显升高,金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌组和对照组浓度分别为(134.5±18.3)、(61.5±15.4)、(3 354.0±809.0)、(6 888.4±1 100.2)和(28.9±4.6)pg/mL;IL-12p70达峰值时的浓度分别为(389.3±118.1)、(127.6±10.0)、(42.2±3.5)、(62.8±8.4)和(4.8±0.3)pg/mL。MIP-1β、MIP-2的浓度在大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组高于其他实验组和对照组(均P<0.01),而IL-12p70的浓度在金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组中高于大肠埃希菌组、肺炎克雷伯菌组和对照组(均P<0.01)。结论大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组MIP-1β和MIP-2的浓度高于金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组,而金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组IL-12p70的浓度高于大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组。联合检测多种细胞因子或趋化因子在预测革兰阳性或革兰阴性菌感染方面有一定价值,且可能为感染早期指导治疗提供依据。
- 杨明麻雅婷何赏段欣欣王佳楠荆颖张可昕王成彬
- 关键词：血流感染MIPMIP小鼠模型IL
- 五种革兰阴性菌血流感染小鼠血清多肽谱的研究
- 2018年
- 目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析5种革兰阴性菌血流感染所致小鼠血清多肽指纹图谱的变化,寻找其共有的多肽峰,并建立相应的诊断模型。方法分别建立ICR小鼠大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和变形杆菌等5种革兰阴性菌的血流感染模型,收集不同时间段血清,行MALDI-TOFMS检测,采用BioExplorer软件分析感染组之间以及感染组与对照组之间的血清差异多肽指纹图谱。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和变形杆菌感染组分别获得95、104、127、115和103个多肽峰;与对照组比较,其差异多肽峰数量分别为73、50、99、62和77个(P<0.01),其中表达趋势为感染组高于对照组的多肽峰有4个,表达趋势为感染组低于对照组的有9个。结论利用MALDI-TOF MS发现了5种常见革兰阴性菌血流感染血清多肽指纹图谱的共有特征峰,为后续寻找血流感染标志物奠定了基础。
- 麻雅婷张可昕张可昕杨明陈琛何赏
- 关键词：革兰阴性菌MALDI-TOFMS血流感染
