蒲琳
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：大连大学附属中山医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰HMGA2基因表达对人肾癌转移细胞株增殖与侵袭影响被引量：3
- 2019年
- 目的用分子生物学研究肾癌形成和进展,可为临床治疗提供更可靠的依据,高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)是近年来研究热点之一。本研究观察HMGA2对肾癌细胞增殖和侵袭能力影响,为肾癌进一步临床研究提供依据。方法培养人肾癌细胞系786-O、769-P、人肾癌转移细胞系ACHN、人正常肾小管上皮细胞系HKC,研究分为3组,HMGA2-siRNA组、Mock-siRNA组和未转染组。利用RNA干扰技术,瞬时转染肾癌ACHN细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测HMGA2mRNA及蛋白表达;MTT法检测干扰后ACHN细胞增殖能力;Transwell法检测干扰后ACHN细胞侵袭能力。结果786-O、769-P、ACHN和HKC细胞系HMGA2mRNA表达量分别为0.82±0.10、0.79±0.09、0.98±0.16和0.04±0.01,组内差异有统计学意义,F=63.36,P=0.002;4种细胞系中HMGA2蛋白表达量分别为0.80±0.09、0.75±0.08、0.94±0.10和0.06±0.02,组内差异有统计学意义,F=49.09,P=0.005。选择ACHN细胞作为后续研究:成功构建特异性沉默HMGA2表达的肾癌细胞株。在转染后24、48、72和96h,HMGA2-siRNA组细胞增殖速度分别为0.69±0.02、0.90±0.05、0.99±0.07和1.10±0.09,Mock-siRNA组细胞增殖速度分别为0.89±0.03、1.36±0.06、1.82±0.08和2.10±0.10,未转染组细胞增殖速度分别为0.91±0.02、1.50±0.06、1.91±0.10和2.20±0.12。HMGA2-siRNA组细胞增殖速度低于Mock-siRNA组和未转染组,F组别=630.724,P<0.001;F时间=566.968,P<0.001;F组别×时间=51.328,P=0.002。在转染后48h,HMGA2-siRNA组、Mock-siRNA组及未转染组穿过细胞数的比值分别为0.34±0.04,0.87±0.09和0.91±0.10,F=6.42,P=0.039。结论用HMGA2-siRNA干扰ACHN细胞,可抑制细胞增殖及侵袭能力,HMGA2基因在肾癌发生、发展中可能发挥“癌基因”作用,HMGA2基因及蛋白表达可能与肿瘤形成、进展和转移密切相关,有望成为肾癌治疗的一个重要靶点。
- 宋玲玲刘颖蒲琳李凯彭大帅吕光耀刘险锋
- 关键词：肾癌RNA干扰增殖
- 高迁移率族蛋白A2在肾癌中的表达及临床意义被引量：4
- 2017年
- 目的：探讨高迁移率族蛋白A2（ HMGA2）在肾癌组织中的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取肾癌组织及癌旁组织50例、肾脏良性肿瘤组织40例，采用免疫组化法检测HMGA2蛋白的表达情况，采用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）和Western blot法检测肾癌组织、癌旁组织及肾脏良性肿瘤组织中HMGA2 mRNA和蛋白表达水平，分析HMGA2表达与肾癌患者临床病理特征及预后的关系。结果 RT-PCR检测显示，HMGA2 mRNA在肾癌组织及癌旁组织、肾良性肿瘤组织中的表达水平分别为0．84±0．23、0．08±0．04和0．19±0．06，肾癌组织中的HMGA2 mRNA表达水平明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织（ P＜0．01）。 Western blot检测显示，肾癌组织、癌旁组织和肾良性肿瘤组织中HMGA2蛋白表达水平分别为0．91±0．24、0．03±0．01和0．12±0．04，肾癌组织中HMGA2蛋白水平明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织，差异有统计学意义（ P＜0．01）。免疫组化检测显示，HMGA2蛋白阳性表达均呈棕黄色、棕褐色细颗粒状，主要分布于细胞核。50例肾癌组织中， HMGA2蛋白阳性表达34例，阳性率为68．0％。50例癌旁组织中，HMGA2蛋白阳性表达1例，阳性率为2．0％。40例肾良性肿瘤组织中，HMGA2蛋白阳性表达3例，阳性率为7．5％。肾癌组织中HMGA2蛋白的阳性率明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织（P＝0．004）。 HMGA2蛋白表达与肾癌患者的TNM分期和淋巴结转移状态有关（均P＜0．05），而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤病理类型无关（均P＞0．05）。34例HMGA2蛋白阳性表达肾癌患者的中位疾病进展时间（TTP）为（22．36±1．48）个月，而16例HMGA2蛋白阴性表达肾癌患者的中位TTP为（34．55±1．87）个月，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 HMGA2有可能成为肾癌诊断和预后的指标，在肾癌的发生发展中
- 刘颖付启忠蒲琳宋玲玲吕光耀刘晶王振龙王子明
- 关键词：肾肿瘤免疫组化临床病理特征预后
- HMGA2基因沉默对肾癌细胞ACHN周期及凋亡的影响被引量：1
- 2021年
- 目的观察高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对肾癌细胞ACHN周期及凋亡的影响,为肾肿瘤后续机制探讨提供根据。方法培养肾癌细胞ACHN,选择HMGA2三个不同的基因片段分别为HMGA2-siRNA1、HMGA2-siRNA2、HMGA2-siRNA3与虚拟基因片段(Mock-siRNA),利用RNA干扰技术,瞬时转染肾癌ACHN细胞,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测HMGA2 mRNA及蛋白表达;PI染色及流式细胞仪检测干扰后ACHN细胞周期的变化。Annexin V-FITC检测干扰后ACHN细胞凋亡效应的影响。结果成功构建使HMGA2基因沉默的肾癌细胞株,并选择HMGA2-siRNA2进行后续试验。细胞周期分析表明,进入Go/G1期的细胞明显增多,而G2/M期的细胞减少,细胞增殖周期阻滞在G1期(P<0.05)。沉默HMGA2基因表达后,肾癌ACHN细胞呈现出明显的早期和晚期凋亡,总体凋亡率从5.69%上升到16.52%(P<0.05)。结论用HMGA2-siRNA干扰ACHN细胞,细胞的周期发生紊乱,凋亡情况明显增强,说明HMGA2在肿瘤的发生、发展、细胞周期和凋亡过程中发挥着重要作用,有望成为治疗肾癌的一个重要靶点,深入研究HMGA2基因对肾癌的靶向治疗具有深远意义。
- 吕光耀蒲琳陈乾付启忠刘险峰董圣芳杨建勋刘颖
- 关键词：肾肿瘤HMGA2凋亡
