周鹏
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：南华大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金湖南省研究生科研创新项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 鹦鹉热衣原体噬菌体Chp1衣壳蛋白VP1的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2018年
- 目的原核表达并纯化鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)噬菌体Chp1衣壳蛋白VP1的重组蛋白rVP11-190,并制备多克隆抗体。方法采用Clustal Omega在线软件对6株衣原体噬菌体VP1蛋白的氨基酸序列进行多重比对,确定Chp1VP1蛋白的保守区和特异区,并用DNAStar软件预测抗原表位。选择VP11-190与pET28a(+)载体连接构建原核表达载体pET28a-VP11-190,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠,制备免疫血清,ELISA法检测其抗rVP11-190的效价。结果构建的原核表达载体pET28(a)-VP11-190经IPTG诱导高效表达了相对分子质量约为30×103的重组蛋白。用该蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体血清,ELISA法测定免疫小鼠血清抗体效价为1∶12 800。结论成功原核表达并纯化了噬菌体Chp1衣壳蛋白VP11-190的重组蛋白,制备的鼠抗VP11-190多克隆抗体血清效价及特异性良好,为进一步分离鉴定鹦鹉热衣原体的噬菌体奠定了基础。
- 李琪王秋平周鹏陈丽丽柏琴琴
- 关键词：鹦鹉热衣原体VP1蛋白原核表达多克隆抗体
- 鹦鹉热衣原体Mip基因原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 目的克隆鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强蛋白(Microphage infectivity potentiator,Mip)基因,构建原核重组质粒,诱导表达重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定了基础。方法提取鹦鹉热衣原体6BC基因组DNA,PCR扩增Mip基因,克隆至p ET-30a(+),构建原核表达载体p ET-30a(+)-Cps Mip。PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导p ET-30a(+)-Cps Mip在E.coli BL21中表达目的蛋白。融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗Mip抗体的效价。结果 PCR扩增得到大小约为768 bp左右的Mip目的片段;经PCR、酶切及测序鉴定,证明构建的原核重组质粒中插入的片段为Cps Mip基因,测序结果经BLAST分析,与Genbank上登录序列完全一致。经IPTG诱导,重组工程菌表达一相对分子量(Mr)约为34 k D的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清效价为1:128 000。结论成功构建了鹦鹉热衣原体Mip基因原核表达载体,并表达了相应可溶性蛋白,制备了高效价的鼠抗Mip多克隆抗体。
- 胡春生符玺宗周鹏柏琴琴曾心靛周朴帆刘子卿张程陈丽丽
- 关键词：鹦鹉热衣原体MIP基因免疫原性多克隆抗体
- 沙眼衣原体类噬菌体衣壳蛋白CtF的表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2018年
- [目的]预测沙眼衣原中类噬菌体衣壳蛋白CtF的空间结构,表达重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用SOPMA和I-TASSER等软件预测CtF的空间结构,利用MEGA6分析其系统发育关系;构建重组质粒pET-28a-CtF,转化至E.coli BL21(DE3)中进行克隆表达;纯化重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。[结果]CtF蛋白包含八股β桶状核心结构和环形延伸结构,与已知的衣原体噬菌体VP1蛋白遗传距离较近;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa的融合蛋白;免疫小鼠获得免疫血清效价达1∶12 800。[结论]CtF蛋白疑似为沙眼衣原体噬菌体的衣壳蛋白;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa蛋白,该蛋白免疫原性良好,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 王秋平李琪欧瑶琪朱冰玉周鹏陈丽丽柏琴琴
- 关键词：沙眼衣原体生物信息分析多克隆抗体
- 白细胞介素-12生物学作用的研究进展被引量：6
- 2017年
- 白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)是一种异源二聚体细胞因子,被认为是细胞免疫应答反应中的初始因子,具有激活T淋巴细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞的功能,可促进这两种细胞的分化与增殖,调控细胞免疫,并诱导这些细胞分泌干扰素γ(interferonγ,IFNγ)。本文就IL-12在抗感染、抗肿瘤和疫苗佐剂中的作用作一综述。
- 周鹏柏琴琴陈丽丽
- 关键词：白细胞介素-12抗感染抗肿瘤疫苗佐剂
- 吖啶橙-金纳米荧光法测金属硫蛋白
- 2022年
- 吖啶橙荧光材料与柠檬酸根修饰的金纳米离子相互作用,通过表面能量转移,致荧光猝灭。在酸性条件下,金属硫蛋白与金纳米有更强结合能力,可以使体系荧光恢复。以λ_(ex)=493 nm为激发波长,测量加入金属硫蛋白前后λ_(em)=526 nm处的荧光变化值,线性范围为9.3×10^(-9)~1.5×10^(-7)mol/L,线性回归方程为ΔF=3.798+337.3C(×10^(-7)mol/L),r=0.9965,检测限为2.79×10^(-9)mol/L,相对标准偏差为0.39%~1.29%,加标回收率在97.09%~99.63%。实验方法已应用于人体尿液样品测定,具有选择性好、精密度和准确度高等优点。
- 陈思涵陈思涵周鹏陈云生王永生
- 关键词：金属硫蛋白金纳米粒子吖啶橙
- 鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强因子对宿主细胞产生前炎症细胞因子和凋亡的影响被引量：3
- 2019年
- 目的研究鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)巨噬细胞感染增强因子(microphage infectivity potentiator,Mip)在诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和对HeLa细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的Cps Mip重组蛋白作用THP-1细胞,ELISA检测前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的表达量;用荧光染色法和流式细胞术分析重组Cps Mip对HeLa细胞凋亡的作用。结果重组Cps Mip能以时间、剂量依赖方式诱导THP-1细胞分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α;不同Cps Mip蛋白浓度实验组刺激THP-1细胞产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α水平显著高于PBS对照组(P<0. 05),当Cps Mip为16μg/ml时,所产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的量最高,分别为105. 01 pg/ml和50. 52 pg/ml。荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率,发现Cps Mip对星形孢菌素(staurosporine,STS)处理的HeLa细胞有一定的抑凋亡作用,在20μg/ml Cps Mip刺激后的细胞凋亡率比未刺激组下降了4. 48%(P<0. 01)。结论 Cps Mip蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α; Cps Mip具有一定抑制HeLa细胞凋亡的作用。
- 曾心靛张婉琪符玺宗周鹏周朴帆唐婷陈曦胡春生陈丽丽
- 关键词：鹦鹉热衣原体CPSMIP凋亡
