孔宁
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定被引量：1
- 2011年
- 为制备只包含抗体可变区片段(Fv)的MAb2-5G2单链抗体(scFv),本研究从分泌MAb2-5G2的杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录制备cDNA作为模板扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。以VH-linker-VL的形式通过重叠PCR制备scFv基因,构建重组表达质粒pEasy-scFv,并在大肠杆菌中获得正确表达。通过western blot和间接免疫荧光鉴定表明scFv蛋白能够被兔抗MAb2-5G2的抗体(Ab3)识别,复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞。该研究结果为进一步明确MAb2-5G2结合Marc-145细胞功能区域奠定了物质基础。
- 于颖王刚宋腾飞孔宁马晓春姚永红肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征抗独特型抗体单链抗体
- PRRSV GP5蛋白新型细胞受体:Ⅱ型非肌肉肌球蛋白A亚型重链
- 目的 前期我们利用鼠抗PRRSV GP5蛋白抗体免疫小鼠制备的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)能够与Marc-145及猪肺泡巨噬细胞(PAM)结合,并且通过免疫沉淀得到一个分子量约为230kDa的可溶性蛋白.经过氨...
- 高继明肖一红王向鹏孔宁穆阳王承宝肖书奇赵钦马玉萍刘宁宁吕军华Julian A.HISCOX周恩民
- 猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用被引量：3
- 2012年
- 为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。
- 马晓春孔宁高继明王彤彤黄柏成赵钦肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒波形蛋白病毒抑制受体阻断
- 猪BST-2全基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析
- 为研究猪BST-2基因的生物学功能,用特异性的引物扩增猪BST-2基因,并利用生物信息学软件对猪BST-2基因及氨基酸进行分子特性分析,同时进行了猪BST-2蛋白的真核表达及组织表达谱分析。结果表明:猪BST-2基因全长...
- 孔宁吴永光孟琼王忠泽童武郑浩李国新单同领周恩民童光志
- 关键词：组织表达谱
- 文献传递
- 基于BAC系统的表达红色荧光蛋白的HP-PRRSV感染性克隆的构建
- 外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial art...
- 黄柏成孔宁李琼毅张昂克王承宝周恩民
- 关键词：高致病性PRRSVDSRED细菌人工染色体
- 稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系的建立
- 2012年
- 为建立稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系,采用RT-PCR方法从非洲绿猴肾细胞(Marc-145)中扩增波形蛋白基因,并将其与EmGFP基因、IRES基因共同克隆到pcDNA3.1/V5-His A载体中,成功构建重组质粒pcDNA3.1-GIV。通过非脂质体转染将其转染至BHK-21细胞中,经G418加压筛选,单克隆挑取,获得稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV。经Western-blot和RT-PCR检测,证明外源波形蛋白成功得到表达。本研究建立的稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV,为研究波形蛋白的生物学功能及与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的关系提供了有利的工具。
- 马晓春高继明孔宁高丽丽王彤彤肖一红周恩民
- 关键词：波形蛋白稳定细胞系BHK-21细胞猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 敲低非肌肉肌球蛋白Ⅱ-A表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的影响
- 目的 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是属于动脉炎病毒属有囊膜的单股正链RNA病毒.病毒细胞受体是介导PRRSV对宿主细胞形成感染的关键因素.目前,已经从PRRSV易感细胞中发现多个蛋白与病毒的结构蛋白或RNA存在...
- 高继明孔宁肖一红张冲王向鹏周恩民
- 抗独特型抗体疫苗阻断高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染
- 引言/目的 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是造成养猪业经济损失的重大疾病之一,其中疫苗免疫是该病防控的主要方式,然而目前的疫苗免疫在实际生产中并不能提供长期保护,因此亟需研发一种安全有效的疫苗.本实验室制备了一株能够模拟...
- 张冲于颖肖书奇王刚孔宁王雪倪怀宝马超刘洪亮李娜高继明赵钦周恩民
- Marc-145细胞周期同步化及PRRSV细胞受体表达与病毒感染的关系
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染病，是危害养猪业的主要传染病之一。该病...
- 孔宁
- 关键词：MARC-145细胞病毒感染
- 文献传递
- PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 【目的】制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体。【方法】提取PAM细胞总RNA，通过RT-PCR方法获得CD163 SRCR5-SRCR6（第1 417～2 136 bp，共720个bp）基因，将其克隆到pET-28a（＋）载体上，构建重组表达载体pET-28a（＋）-CD163，经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌，在BL21（DE3）中诱导重组目的蛋白表达，然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白，免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价，并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞的活性。【结果】克隆了720 bp的CD163 SRCR5-SRCR6基因，成功构建了pET-28a（＋）-CD163重组表达载体；SDS-PAGE结果表明，CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白被成功诱导并以包涵体形式表达；Western blot结果表明，重组蛋白具有良好的免疫原性，间接ELISA方法测得免疫Balb/c小鼠制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体效价可达105；IFA试验结果显示，制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体可与Marc-145细胞结合，且在1∶20、1∶40倍稀释时，能部分阻断高致病性PRRSV SD16毒株感染Marc145细胞。【结论】用大肠杆菌原核表达系统成功诱导表达了CD163 SRCR5-SRCR 6重组蛋白，用重组蛋白免疫小鼠获得了高效价多克隆抗体，其可以结合细胞并阻断PRRSV感染细胞。
- 马玉萍孔宁王向鹏高继明赵钦王承宝周恩民
- 关键词：PRRSV多克隆抗体
