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张恩慧: 作品数：14 被引量：65H指数：5; 供职机构：江西中医药大学更多>>; 发文基金：江西省自然科学基金江西省卫生厅中医药科研基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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广西普通油茶种质资源遗传多样性的SSR分析被引量：10: 2016年; 普通油茶（Camellia oleifera）是我国分布最广、产量最多的山茶属中一个重要油料树种。广西是普通油茶的重要分布区,种质资源十分丰富。为深入了解广西普通油茶种质资源的遗传变异,服务于种质保存和品种选育,该研究首先对已开发的SSR分子标记进行多态性筛选和评价,在此基础上利用多态性较高的引物,对97份广西有代表性的普通油茶种质资源进行遗传多样性分析。结果表明：（1）在已开发的10对油茶SSR分子标记中,7对能稳定扩增且表现为共显性,2对扩增不稳定,另外1对无法扩增出产物。（2）7对共显性SSR标记总共检测到33个等位基因,每对标记检测到等位基因数目的变化范围为3-6个,平均每个位点等位基因数为4.714 3个,有效等位基因数目的变化范围为2.084 2-4.314 8,平均有效等位基因数为2.828 8;基因多样性变化范围为0.520 2-0.768 2,平均每个位点基因多样性为0.628 1。（3）参试群体中绝大多数位点未处于Hardy-Weinberg平衡,存在遗传结构;观测杂合度和期望杂合度的变化范围分别为0.413 0-0.670 1和0.523 3-0.772 4,其平均值分别为0.569 8和0.631 6。（4）种质资源间遗传距离变化范围为0.05-0.791 7,平均遗传距离为0.354 5;UPGMA聚类显示相同来源的种质资源无法聚成一类,在同一聚类分支上混有不同来源的种质资源。这表明已开发的油茶SSR分子标记适用于广西普通油茶,广西普通油茶种质资源拥有较丰富的遗传多样性。该研究结果为广西普通油茶资源的深度开发和高效利用提供了科学依据。; 张恩慧王晓云覃子海赵文东韦长江王鹏良; 关键词：普通油茶 SSR标记复等位基因

栀子类胡萝卜素剪切双加氧酶基因GjCCD4的克隆与原核表达被引量：5: 2016年; [目的]类胡萝卜素剪切双加氧酶(Carotenoid cleavage oxygenase,CCD)是西红花总苷生物合成途径的关键酶,本研究拟从栀子果实中克隆CCD基因。[方法]在NCBI数据库中搜索CCD蛋白,获得种子序列后,构建系统进化树,按照亲缘关系分组。再利用CODEHOP法,针对每个组设计简并引物,在栀子果皮和果肉c DNA中扩增,获得保守区段。然后通过RACE获得基因全长。构建pet28a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌株后在30℃培养4 h,转化菌株Aritic Expression(DE3)后在15℃培养过夜,诱导蛋白表达。[结果]克隆了一个GjCCD4基因,长1 863 bp,编码的蛋白质N端序列变动较大,C端保守性强,N-末端含有一个叶绿体定位的信号肽。系统发育分析表明,GjCCD4蛋白与拟南芥和西红花的同源蛋白聚在同一个簇。在BL21(DE3)和AE(DE3)菌株的沉淀中表达出大量包涵体形式的融合蛋白,在BL21(DE3)菌株的上清中表达出少量可溶蛋白。[结论]获得了一个类胡萝卜素剪切双加氧酶基因GjCCD4,通过原核表达获得了少量可溶蛋白。; 王晓云陈蓉张恩慧; 关键词：栀子克隆

藏药桃儿七干预高转移小鼠乳腺癌的作用研究被引量：5: 2014年; 目的建立小鼠乳腺癌高转移模型,研究桃儿七对小鼠乳腺癌生长的干预作用以及乳腺癌肺转移的抑制作用。方法将乳腺癌高转移模型小鼠随机分为6组:模型组(纯水)、阳性组(他莫昔芬4.1 mg·kg-1)、低剂量组(0.3 g·kg-1)、中剂量组(0.6 g·kg-1)、高剂量组(1.2 g·kg-1)、空白组(纯水)。观察并测量高转移乳腺癌小鼠的肿瘤体积,25d后断颈处死小鼠,对小鼠乳腺癌肺部转移病灶结节进行结节计数。结果高、中、低剂量桃儿七水煎液能够减慢乳腺癌小鼠肿瘤生长速率,抑制肿瘤生长,乳腺癌抑制率分别达到了77.99%、66.53%、40.16%;高、中剂量的桃儿七还能够明显抑制小鼠乳腺癌的肺转移(P<0.05),高、中、低剂量组、阳性组以及模型组肺结节计数(个)分别为:0.08±0.32、0.75±1.6、0.90±1.29、1.4±2.12、3.08±3.55。结论藏药桃儿七可减缓原位乳腺癌的生长,对乳腺癌有强烈的抑制作用,高剂量使用还可以抑制乳腺癌的肺转移。; 叶耀辉马越兴张恩慧应亚宾王婷张文雪; 关键词：桃儿七乳腺癌癌转移

藏药桃儿七HPLC指纹图谱产地识别及质量评价被引量：8: 2013年; 目的:建立藏药桃儿七的HPLC指纹图谱,比较不同产地桃儿七成分含量差异,进行产地识别,综合评价桃儿七质量。方法:采用HPLC,Agilent Zorbax SB C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.04%甲酸水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,对16批桃儿七样品进行指纹图谱测定,并使用主成分分析和聚类分析对指纹图谱进行产地识别和质量评价。结果:建立了桃儿七药材指纹图谱;对16批样品相似度比较,标定了29个共有峰;各产地样品成分组成基本相同,但是含量存在一定差异;对各样品进行化学模式识别,根据主成分得分,产自西藏的药材质量最好。结论:该方法能够用于桃儿七药材综合评价及质量控制。; 叶耀辉马越兴应亚宾张恩慧王婷张寿文; 关键词：桃儿七指纹图谱

桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌筛选及鉴定被引量：3: 2017年; 目的:筛选和鉴定濒危藏族药桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌,为保护桃儿七植物资源和发现新的天然活性菌株提供参考。方法:采用组织块法对桃儿七茎部的内生真菌进行分离,利用TLC和HPLC检测其代谢产物中的鬼臼毒素类成分,检测波长254 nm,流动相乙腈-水(40∶60)。采用形态学和分子生物学相结合的方法对产鬼臼毒素类成分的内生真菌进行鉴定。结果:共分离得到9株内生真菌,其中菌株J-1,J-2,J-3的发酵液中含有鬼臼毒素类成分,分别鉴定为Chaetomium globosum strain MF564,C.sp.4RF3和Pseudallescheria sp.T55。结论:从桃儿七茎中分离到3株产鬼臼毒素类成分的内生真菌,分别来源于2个新属的不同种菌株,为开发新绿色生物能源和实现内生真菌工业发酵生产鬼臼毒素类成分奠定了理论基础。; 王婷马越兴叶耀辉郑红梅张博文张恩慧; 关键词：桃儿七内生真菌鬼臼毒素分子鉴定系统进化树

穿心莲香叶基香叶基焦磷酸合成酶基因的克隆与表达: 2015年; 目的从穿心莲中克隆穿心莲内酯合成途径中的香叶基香叶基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPS)基因,并进行组织表达等特征研究。方法采用CTAB-LiC1法从穿心莲茎和叶中提取总RNA,简并引物扩增获得保守区段,RACE法获得基因全长,ProtParam等软件分析基因特征,实时荧光PCR法检测不同发育时期穿心莲茎和叶中基因的表达。结果获得了一个长1 047 bp的GGPS基因,编码一条由348个氨基酸组成的蛋白质序列,与长春花的GGPS蛋白亲缘关系较近,N端含有一个由47个氨基酸构成的质体信号肽。在穿心莲的茎和叶中,GGPS基因在花蕾期表达量较高,初花期降低;到了花果混合期表达量升高,青果期下降。表明穿心莲花蕾期和花果混合期相关代谢成分的合成可能更活跃。结论从穿心莲中克隆了GGPS基因,为开展穿心莲内酯合成途径的调控奠定了基础。; 王晓云陈蓉张恩慧钟国跃; 关键词：穿心莲穿心莲内酯生物合成途径克隆

藏药桃儿七与小叶莲HPLC分析及其毒性差异研究被引量：8: 2014年; 目的:比较桃儿七、小叶莲化学成分的异同,分析桃儿七、小叶莲的化学成分与毒性的关系,为建立鬼臼毒素类藏药的指纹图谱提供依据。方法:利用HPLC分析方法,分析桃儿七、小叶莲化学成分的差异,结合急性毒性实验方法测定桃儿七和小叶莲的LD50值,比较两药毒性差异,分析桃儿七、小叶莲鬼臼成分与毒性的关系,为桃儿七、小叶莲的质量标准提供依据。结果:标定了桃儿七与小叶莲的14个共有峰;桃儿七药材中鬼臼毒素、4'-去甲鬼臼毒素含量明显高于小叶莲,桃儿七、小叶莲LD50分别为0.088 7,0.909 8 g·mL-1。结论:桃儿七、小叶莲化学成分基本相同,但化学成分含量差异较大。桃儿七鬼臼毒素含量更高,毒性更强,在制定药材质量标准时应严格控制鬼臼毒性成分的含量。; 叶耀辉马越兴张恩慧应亚宾王婷; 关键词：桃儿七高效液相色谱毒性

不同生长年限野生和移栽彭泽贝母中3个生物碱含量的比较被引量：3: 2015年; 目的：建立HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛3个生物碱类成分含量的方法,并测定不同生长年限野生和移栽品种3个化合物的含量,观察其动态变化规律。方法：采用Hypersil ODS2色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈（A）-0.03%二乙胺（B）梯度洗脱,流速：1.0 m L/min,漂移管温度：99.5℃,载气流速：2.2L/min。结果：建立了HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛3个生物碱类成分含量的方法,3个成分均达到基线分离,线性关系良好（r〉0.9991）;平均加样回收率（n=6）分别为96.6%、98.9%、96.2%。野生彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛的含量较移栽的略高,在一定年限内,随着生长年限的增加,这3种生物碱的含量逐渐增大。结论：该方法操作简单、快速、重复性好,为彭泽贝母药材的质量控制奠定了基础。3个生物碱总含量随生长年限的不同而异,野生4~5年生达到最高。; 叶耀辉应亚宾陈丽华温思菁张恩慧王婷; 关键词：贝母素甲贝母素乙贝母辛 HPLC-ELSD

植物内生真菌抗虫活性研究进展被引量：5: 2016年; 近年来,从药用植物内生真菌及其代谢物中寻找新型药用化合物的研究成为热点,而以它们作为农用菌株开发新型生物农药的研究也在不断兴起。本文主要对内生真菌的抗虫活性进行了综述,其中包括内生真菌的抗虫作用、抗虫机理、抗虫影响因素、抗虫活性测定方法以及内生真菌在研究中存在的问题和发展前景。; 王婷叶耀辉郑红梅张博文马越兴张恩慧; 关键词：内生真菌代谢产物抗虫性

穿心莲甲羟戊酸5-焦磷酸脱羧酶基因的克隆与表达被引量：4: 2016年; 穿心莲内酯是穿心莲的主要药效成分,广泛用于抗炎。为了对它的生物合成进行遗传调控,提高内酯类成分的合成量,作者在转录组数据分析的基础上,获得了穿心莲内酯生物合成途径中甲羟戊酸5-焦磷酸脱羧酶基因的3个克隆,包含的ORF均长1 260 bp,分别在4个位点具有单碱基的差异。它们编码由419个残基组成的氨基酸序列;保守结构域中均具有11个高度保守的氨基酸,分别决定催化反应的特异性和活性;N端不含有质体定位的信号肽;与丹参的MVD蛋白(Gen Bank号AEZ55675.1)一致性较高。在穿心莲茎和叶片中,MVD基因的表达量分别在花蕾期和初花期最高,但各时期表达量的倍数差异不大。该研究获得的MVD基因,为后续进行详细的功能解析,并进一步应用于穿心莲内酯的遗传调控,奠定了基础。; 王晓云陈蓉张恩慧钟国跃; 关键词：穿心莲穿心莲内酯生物合成途径克隆

张恩慧

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