刘坤
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
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- 一种获得人类甲胎蛋白的方法
- 本发明公开了一种获得人类甲胎蛋白的方法，是把人类甲胎蛋白基因克隆到昆虫细胞的表达载体pFastBac 1、pFastBac Dual或pFastBac1?Gus中，并转化DH10Bac后，获得含有人类甲胎蛋白基因的Bac...
- 林波刘坤朱明月李伟董栩李孟森
- 文献传递
- α-芋螺毒素GIC与Ac-AChBP共结晶条件的筛选与优化被引量：1
- 2017年
- 旨在筛选及优化α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)共结晶的条件,得到高分辨率的共结晶晶体。在昆虫表达系统中分泌表达海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-ACh BP),并用凝胶色谱进行纯化,把纯化的乙酰胆碱结合蛋白与α-芋螺毒素GIC共结晶,利用结晶机器人及HAMPTON RESEARCH结晶试剂盒进行结晶及结晶条件的筛选与优化。结果显示,在0.6 mol/L Ammonium citrate dibasic,0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate p H4.8的条件下生长的晶体较好,其分辨率可以达到2.1?。筛选与优化结晶条件(Ammonium citrate dibasic的摩尔浓度及0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate的p H值)可以得到高分辨率的α-芋螺毒素GIC与Ac-ACh BP共结晶晶体。
- 林波刘坤朱明月李伟董栩李孟森
- 一种高效表达AFP3-CASP3融合蛋白的方法
- 本发明公开了一种高效表达AFP3‑CASP3融合蛋白的方法，属于生物技术领域，本发明把HBx基因克隆到慢病毒中，用慢病毒‑HBx感染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把含有AFP第3个结构域和CASP3基因的表达载...
- 刘坤林波朱明月李伟董栩李孟森
- 文献传递
- 慢性低强度应激抑郁症模型大鼠组织中5-羟色胺和色氨酸羟化酶的表达变化被引量：8
- 2017年
- 目的:为抑郁症治疗药物的开发提供依据和思路。方法:将适应性喂养7d的大鼠随机分为正常组、抑郁组和治疗组(氢溴酸西酞普兰1 mg/kg),每组8只,抑郁组和治疗组大鼠每天随机给予1次低强度刺激[夹尾刺激(1min)、频闪照明刺激(120次/min,12h)、噪声刺激(4h)、冰水游泳刺激(1h)、热水刺激(45℃,1h)、电击足底(10 Hz,1mA,每次间隔100 ms,100次)、禁食禁水(24h)],连续21 d建立应激抑郁症模型。分别于适应性喂养第0、7天和应激第7、14、21天称量各组大鼠体质量,检测旷场实验中大鼠的水平移动频率和垂直活动频率。应激结束后,各组大鼠ig相应药物,连续30d后检测脑、肝、肾组织中5-羟色胺(5-HT)和色氨酸羟化酶(TPH)的表达。结果:与正常组比较,抑郁组和治疗组大鼠从应激第14天起体质量增加趋势减慢(P<0.05)。抑郁组和治疗组大鼠应激第14、21天的水平移动频率较前一时间点明显降低(P<0.05或P<0.01),应激第21天的垂直活动频率较前一时间点明显降低(P<0.05或P<0.01);给药30 d后,治疗组大鼠水平移动频率和垂直活动频率较前一时间点明显升高(P<0.01)。与抑郁组比较,治疗组大鼠脑、肾组织中的5-HT水平明显增加(P<0.05),脑组织中TPH水平明显增加(P<0.05)。结论:应激大鼠模型抑郁症的发生与大鼠脑组织中TPH表达的降低从而导致5-HT水平降低有关,提示TPH可作为抑郁症治疗的靶点。
- 陈栘徐海霞朱明月刘坤林波罗儒献陈川柏李孟森
- 关键词：抑郁症模型5-羟色胺色氨酸羟化酶
- α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白共结晶的结构特点
- 2016年
- 烟碱型乙酰胆碱受体(n AChRs)是配体门控离子通道,它与疼痛、阿尔茨海默氏病、成瘾等疾病密切相关。α-芋螺毒素是n AChRs的拮抗剂,也是治疗上述疾病的先导药物。乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)与n AChRs的配体结合结构域同源性较高,它们的药理特性和离子通道激活机制也相类似,α-芋螺毒素与ACh BPs共结晶结构解析了α-芋螺毒素残基如何选择结合n AChRs。现对α-芋螺毒素与ACh BPs共结晶结构进行综述,旨在剖析α-芋螺毒素与n AChRs相互作用的关键残基,为开发药效更好的芋螺毒素提供参考依据。
- 林波刘坤李孟森
- 关键词：烟碱型乙酰胆碱受体
- AFP通过Wnt/β-catenin通路诱导肝细胞的恶性行为
- 目的:HCC（hepatocellular carcinoma,肝细胞癌）是严重影响人类生命的疾病之一,在肝癌的发生发展过程中,AFP（alpha fetoprotein,甲胎蛋白）不但作为一种肿瘤标志物,还作为其中的一...
- 刘坤
- 关键词：甲胎蛋白WNT/Β-CATENIN通路L02细胞恶性行为
- 文献传递
- 抑制GATA5蛋白可否促进HELA细胞中癌干细胞因子sox2、c-myc及CD44的表达被引量：4
- 2019年
- 背景:GATA5蛋白在多种癌症发生过程中被抑制表达,有研究显示GATA5降低表达或被甲基化后失去功能,不能有效促进干细胞分化,维持细胞的正常功能。宫颈癌HELA细胞表达GATA5蛋白,在宫颈癌中抑制GATA5表达是否可促进其恶性转化还是未知。目的:分析GATA5蛋白在宫颈癌HELA细胞中被进一步抑制表达后,其恶性转化情况及与癌干细胞形成相关因子sox2,c-myc及CD44的表达情况。方法:转入CMV-siRNA-gata5,使GATA5在HELA细胞中被进一步抑制表达后,(1)RT-PCR检测c-myc mRNA,sox2 mRNA的表达;(2)MTT法检测HELA细胞的增殖能力;(3)检测HELA细胞的集落形成和软琼脂单克隆形成能力;(4)Western blot检测细胞GATA5、c-myc、sox2蛋白表达变化;(5)激光共聚焦检测细胞的CD44蛋白定位及蛋白表达变化。结果与结论:用CMV-siRNA-gata5抑制HELA细胞中的GATA5表达后,HELA细胞的增殖能力、单克隆形成及集落形成能力均增强;同时发现其癌干细胞因子c-myc,sox2,CD44的表达增强。提示GATA5蛋白被抑制表达后,HELA细胞的恶行性为增加,其机制可能是GATA5被抑制后,促进了癌干细胞因子sox2,c-myc,CD44等的表达。
- 冯海鹏郑艺菲周莹李志路孙艳刘坤刘坤王桥芸孟波林波李孟森
- 关键词：HELA细胞C-MYCSOX2CD44干细胞
- 一种高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法
- 本发明公开了一种高效表达AFP3‑PTEN融合蛋白的方法，属于生物技术领域，本发明把HBx基因克隆到构建的表达载体中，把构建的载体转染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把AFP第3个结构域和全长PTEN基因连接到表...
- 林波朱明月李伟董栩刘坤李孟森
