目的:分析兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代培养细胞核型。方法:应用组织块法处理野外采集兴义维蚋蚋卵(胚胎),以改良Shields and Sang M3为基础培养基,pH 6.0-6.5,置于28℃生化恒温培养箱中进行原代细胞培养,选取10个处于有丝分裂增殖时期的细胞,通过秋水仙素处理,制作中期染色体标本,进行核型分析。结果:显微镜下观察,前中期染色体为3对(2n=6),染色体凝集程度未达最大化呈现长杆状,染色体长度为9.43-13.58μm;中期染色体为3对(2n=6),高度凝集呈现短杆状,染色体长度为2.43-4.67μm,两条中期染色体臂比值〈1.67,属中着丝粒染色体,4条染色体臂比值〉1.67,属亚中着丝粒染色体。结论:初步阐析了兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代培养细胞核型特征。
【目的】筛选出最适宜兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞的培养条件和最佳培养基组合,并对其原代细胞进行鉴定,为蚋类细胞系的建立打下基础。【方法】采用组织块和单细胞法对兴义维蚋蚋卵(胚胎)进行原代细胞培养,分析培养基、温度、pH、CO2和培养器皿对细胞培养的影响;并测定蚋卵(胚胎)及原代细胞的rDNA-ITS区序列,通过构建基于ITS区序列的蚋类系统发育进化树鉴定其种属来源。【结果】兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞最适宜的培养方法为组织块法,培养基为改良型Shields and Sang M3,pH 6.0-6.5,培养温度28℃,恒温生化培养箱和5% CO2培养箱对原代细胞培养无明显差异,培养器皿为经多聚赖氨酸(PLL)处理的一次性塑料培养皿/板。由基于ITS区序列构建的蚋类系统发育进化树可知,蚋卵(胚胎)及其原代培养细胞均来源于兴义维蚋。【结论】成功建立的兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞培养方法可在科研生产中进一步推广应用。