刘彤
- 作品数：25 被引量：58H指数：3
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 辣椒素对老年人盐味觉敏感度的影响被引量：2
- 2020年
- 目的观察老年人盐味觉情况,探讨辣椒素对老年人盐味觉敏感度的影响。方法采用横断面设计,将2017年4月至2018年9月中国医科大学附属第一医院老年心血管内科115例60~95岁住院患者作为研究对象。其中90例患者完整留取24 h尿液。盐味觉测试应用NaCl溶液和添加0.5μmol/L辣椒素(NaCl+CAP)溶液测定盐阈值、盐喜好。结果盐阈值≥50mmol/L共53例(46.1%);盐喜好为75mmol/L、100mmol/L共66例(57.4%)。总体24 h尿钠中位水平为89.2(48.8)mmol/24h,对应食盐摄入量为7.3(4.0)g/d。辣椒素添加前后患者盐喜好差异具有统计学意义(P<0.01)。配对差异检验结果显示,19例(63.3%)盐阈值为50mmol/L与17例(73.9%)盐阈值为75 mmol/L的患者指出NaCl+CAP溶液的盐味强度大于NaCl溶液,提示受试者盐味感知明显增加。结论老年人盐阈值≥50 mmol/L,盐喜好为75 mmol/L、100mmol/L居多,盐摄入量>6g/d。总体、男性及女性摄盐达标率均不足50%。0.5μmol/L辣椒素可以明显增加老年人对咸味的感知,降低盐喜好,增加盐味觉敏感度。
- 刘彤陈思娇祝之明
- 关键词：老年人辣椒素
- 构建具有学科特点的细胞生物学PBL教学模式
- 以问题为基础学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是目前发达国家普遍采用并被广泛认同的一种医学课程模式,它是将问题作为基本因素,将课程的内容相互联系起来,使学生在不断的提出问题和解决问题中...
- 方瑾李丰张惠丹于敏王桂玲李想李晓东刘彤李妍邵阳光
- 关键词：PBL细胞生物学教学模式
- 不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达
- 2011年
- 目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。
- 刘彤李洋朱戈李丰
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 一种高效而经济获得长片段基因突变体的方法被引量：8
- 2006年
- 重组PCR方法的发展为体外突变技术提供了更快捷、准确的方法.通过改进引物设计和PCR保真性等方法,应用重叠延伸PCR的原理成功地实现了对BA基因的定点突变,并构建了其含有m1,m2,m3和m4的突变体.实验证明通过这种改进方法可以有效地进行长片段基因的突变,并且这种方法与其他方法相比具有简便、快捷、经济、高效的特点.
- 刘彤李晓东王桂玲李家滨李丰
- 关键词：定点突变
- 小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制
- 2014年
- 目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。
- 张健刘彤李瑞娟刘奇李丹妮李丰
- 关键词：人胃癌COFILIN
- 肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。
- 王雪莲栾和芝刘彤赵雨杰安春丽
- 关键词：肺孢子菌嵌合基因重组融合蛋白
- hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位被引量：1
- 2009年
- 目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。
- 蔡鑫泽顾卉刘彤李丰
- 关键词：质粒构建
- hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位
- 2010年
- 目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。
- 李洋刘彤李丹妮李丰
- 关键词：基因克隆融合蛋白转染
- GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。
- 顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟
- 关键词：质粒原核表达
- 野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达
- 2014年
- 目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。
- 刘彤李丹妮李洋李丰
- 关键词：真核表达
