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ANKIB1单克隆抗体的制备及应用被引量：1: 2013年; 目的:制备抗人ANKIB1的小鼠单克隆抗体。方法:PCR扩增人ANKIB1(1-480)的编码序列,构建pGEX-5X-ANKIB1(1-480)表达载体。在大肠杆菌中诱导表达GST-ANKIB1(1-480),利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。使用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot和免疫沉淀实验鉴定抗体,并检测ANKIB1在哺乳动物细胞中的表达。结果:获得了一株杂交瘤细胞株(7A9),所分泌的抗体对人、大鼠和小鼠ANKIB1均具有很高的灵敏性和特异性。ANKIB1在哺乳动物细胞中高表达。结论:成功制备了抗ANKIB1的单克隆抗体,ANKIB1在人、大鼠和小鼠脑以及人胚肾细胞293ET中均有较高水平的表达。; 杨子善谢云飞解博红任太芳王永淑丰慧根刘世饶马振玲; 关键词：单克隆抗体

DNA分子体外重组实验教学的两种优选方案被引量：1: 2012年; DNA分子体外重组技术是基因工程的核心技术之一。国内许多高校在开设这一技术的实验教学中都采用了TA克隆法这一比较落后的实验方法。为了使学生更好地掌握DNA分子体外重组技术,增强技术的实用性,有必要在实验教学内容上作出调整。姊妹PCR克隆法和平末端克隆法是2种简单、经济、重复性好的克隆方法,其中姊妹PCR克隆法不需对目的基因进行酶切处理,即能得到具有各种黏性末端的DNA分子,可直接定向克隆到经相应内切酶消化的载体中。这2种方法不仅能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中各类载体的构建。; 谢云飞解博红

制备两端带有限制性内切酶粘性末端的目的DNA片段的方法: 本发明公开了一种制备两端带有限制性内切酶粘性末端的目的DNA片段的方法。本发明中，根据骨架载体上预期插入的多克隆位点设计两对引物，以含有目的基因的DNA为模板，分别用两对引物进行PCR扩增，得到两种PCR扩增产物，将两种...; 谢云飞解博红徐光翠李小英闫清华; 文献传递

ANKIB1相关泛素结合酶的筛选: 2014年; 含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domain-containing protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING(RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶(E3)活性.ANKIB1也被推测为一种E3,但迄今尚未证实.RBR型E3能够与多种泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,Ubc,统称E2)互作并发挥催化作用,其中最常见的是UbcH7,UbcH8和UbcH5B次之.为了筛选ANKIB1相关的E2,本研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白,并采用GST沉降(GST pull-down)实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用.实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用,同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白.本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持,并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索.; 马振玲解博红刘世饶杨子善谢云飞; 关键词：泛素结合酶蛋白质相互作用

hRFT2基因单核苷酸多态性的生物信息学分析被引量：1: 2012年; 旨在筛选可能与人类疾病有关的hRFT2基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)和突变位点,从SNP数据库中检索并筛选出395个有效的hRFT2基因SNPs,其中包括30个同义SNPs(synonymous SNPs,sSNPs)和31个非同义SNPs(non-synonymous single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)。分别采用SIFT、SNPs3D和PolyPhen-2方法分析nsSNPs引起的氨基酸替换是否可能影响hRFT2的功能。结果表明,5个nsSNPs(rs11477762、rs146302587、rs146492942、rs76947760和rs145431028)可能严重影响hRFT2蛋白的功能,其中rs76947760和rs145431028的影响已得到临床证明,另外3个nsSNPs(rs148387972、rs140391358和rs3746802)也可能对hRFT2有较大的影响。; 谢云飞解博红杨子善; 关键词：单核苷酸多态性

含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2015年; 目的表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10。在大肠杆菌中诱导表达HisZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签。用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果成功构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达。利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验。结论本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。; 王磊张亚平杨海杰谢云飞丁琼琼张彬彬冯志伟; 关键词：多克隆抗体纯化

ANKIB1的克隆、原核表达和纯化被引量：1: 2013年; 含锚蛋白重复序列和IBR结构域蛋白1(ANKIB1)含有RING-IBR-RING结构域、ANK模体和泛素结合模体,可能具有E3泛素连接酶活性和特殊的催化机制,但其功能目前所知甚少。采用巢式PCR技术分段扩增了人ANKIB1基因的cDNA,并通过基因重组构建了全长ANKIB1基因的完整编码序列。将ANKIB1连接到原核表达载体pGEX-5X-3中,用于表达GST-ANKIB1融合蛋白。在含有RING型蛋白稳定剂ZnCl2的培养基中,转化pGEX-5X-ANKIB1的大肠杆菌BL21(DE3)经过0.1 mmol/L IPTG在15℃低温条件下诱导10 h,成功表达了分子量高达148.5 kD的可溶性GST-ANKIB1蛋白。利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析,纯化了GST-ANKIB1融合蛋白。; 谢云飞杨子善马振玲解博红刘世饶; 关键词：克隆纯化

一种新的人Beclin1转录本的克隆、原核表达和纯化: 2017年; 目的克隆新的人Beclin1转录本DEL-E8-E10并对其所编码的蛋白质进行表达和纯化。方法以SiHa细胞的cDNA作为模板进行聚合酶链式反应(PCR)扩增DEL-E8-E10基因,构建原核表达载体pET32a-DEL-E8-E10。在大肠杆菌中诱导表达His-DEL-E8-E10融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化His-DEL-E8-E10融合蛋白。结果克隆到DEL-E8-E10基因,成功构建原核表达载体pET32a-DEL-E8-E10,并获得可溶性表达。利用镍柱亲和层析纯化HisDEL-E8-E10融合蛋白。结论纯化出His-DEL-E8-E10融合蛋白,为进一步研究新的转录本DEL-E8-E10编码蛋白质与宫颈癌之间的关系提供了实验基础。; 杨秀林张亚平何全中谢云飞潘莹; 关键词：转录本纯化

ANKIB1在炎症中的作用和机制: 炎症反应是机体抵御感染和损伤的复杂的级联过程。生物信息学表明,含锚蛋白重复序列和IBR结构域蛋白1(ANKIB1)含有丰富的结构域和模体,如ANK结构域、泛素结合模体(ubiquitin.interacting moti...; 李渊博谢云飞; 关键词：炎症 NF-ΚB; 文献传递

ANKIB1在炎症中的作用和机制: 炎症反应是机体抵御感染和损伤的复杂的级联过程.生物信息学表明,含锚蛋白重复序列和IBR结构域蛋白1(ANKIB1)含有丰富的结构域和模体,如ANK结构域、泛素结合模体(ubiquitin.interacting moti...; 李渊博谢云飞; 关键词：炎症 NF-ΚB

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谢云飞