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实时荧光定量PCR法检测人粪便中艰难梭状芽孢杆菌被引量：3: 2015年; 目的摸索并明确实时荧光定量PCR技术检测人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的方法。方法用16S rRNA real-time PCR方法检测喘息患儿与正常儿童肠道内梭状芽孢杆菌的数量。结果常规PCR扩增出艰难梭状芽孢杆菌16S rRNA部分基因片段长度为500 bp^750 bp,测序结果正确,符合预期,成功构建了艰难梭状芽孢杆菌实时荧光定量PCR中的标准品,生成的标准曲线r2>0.995;实时荧光定量PCR产物的溶解曲线为单峰,表明实时荧光定量PCR的特异性强。对待测80份样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间标准品Ct值的变异系数(CV)为4.96%、3.45%、2.46%、2.43%和2.75%。80份儿童粪便样本中艰难梭状芽孢杆菌含量的对数值为3.70±2.71(copy/g湿便)。结论本研究表明,实时荧光定量PCR方法操作简便、灵敏度高、特异性强、自动化程度高,适用于人体粪便中艰难梭状芽孢杆菌含量的检测。; 王宗润张力文王宗美张云峰; 关键词：引物

肠道菌群与支气管哮喘关系的研究进展被引量：7: 2015年; 人体肠道内细菌数量巨大，种类繁多，目前已发现500多种，细菌数目约10^14个，为人体细胞总数的10倍，是一个极其庞大及复杂的微生态系统。不同个体肠道细菌成分差异较大，甚至是在双胞胎之间也有不同。而一旦个体肠道内细菌早期定植形成后，肠道内菌群会保持一个稳定状态，通过这种稳态改变与生理学变化的联系，使利用肠道菌群诊断及治疗疾病成为可能。; 闫晓明张力文王宗润王宗美张云峰; 关键词：肠道菌群支气管哮喘儿童免疫应答

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价被引量：6: 2014年; 目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物，以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品，应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品及待测样本进行分析，建立绝对定量的标准曲线，同时计算出待测样本双歧杆菌浓度；根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度；分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性；重复检测梯度稀释的标准品，用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp，测序结果正确，成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品；生成的标准曲线R2＝0.999，最低检测限度为每个反应1.48＆#215;102个拷贝；实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测，各组间每微升1.48×10^3～1.48×10^7个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94％、3.39％、3.54％、3.08％和3.34％。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数·-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强，且重复性好，适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。; 张力文王宗润吴秀丽房明丽张云峰; 关键词：引物双歧杆菌

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王宗润

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