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王宗润
作品数:
3
被引量:14
H指数:3
供职机构:
吉林大学第二医院
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发文基金:
国家自然科学基金
吉林省科技发展计划基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
王宗美
唐县人民医院
张力文
南京医科大学附属常州第二人民医...
张云峰
吉林大学第二医院
闫晓明
吉林大学第二医院
房明丽
吉林大学第一医院
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医药卫生
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吉林大学白求...
作者
3篇
王宗润
2篇
张云峰
2篇
张力文
2篇
王宗美
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吴秀丽
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张力文
1篇
张云峰
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房明丽
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闫晓明
传媒
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中国卫生检验...
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中国综合临床
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吉林大学学报...
年份
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2015
1篇
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实时荧光定量PCR法检测人粪便中艰难梭状芽孢杆菌
被引量:3
2015年
目的摸索并明确实时荧光定量PCR技术检测人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的方法。方法用16S rRNA real-time PCR方法检测喘息患儿与正常儿童肠道内梭状芽孢杆菌的数量。结果常规PCR扩增出艰难梭状芽孢杆菌16S rRNA部分基因片段长度为500 bp^750 bp,测序结果正确,符合预期,成功构建了艰难梭状芽孢杆菌实时荧光定量PCR中的标准品,生成的标准曲线r2>0.995;实时荧光定量PCR产物的溶解曲线为单峰,表明实时荧光定量PCR的特异性强。对待测80份样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间标准品Ct值的变异系数(CV)为4.96%、3.45%、2.46%、2.43%和2.75%。80份儿童粪便样本中艰难梭状芽孢杆菌含量的对数值为3.70±2.71(copy/g湿便)。结论本研究表明,实时荧光定量PCR方法操作简便、灵敏度高、特异性强、自动化程度高,适用于人体粪便中艰难梭状芽孢杆菌含量的检测。
王宗润
张力文
王宗美
张云峰
关键词:
引物
肠道菌群与支气管哮喘关系的研究进展
被引量:7
2015年
人体肠道内细菌数量巨大,种类繁多,目前已发现500多种,细菌数目约10^14个,为人体细胞总数的10倍,是一个极其庞大及复杂的微生态系统。不同个体肠道细菌成分差异较大,甚至是在双胞胎之间也有不同。而一旦个体肠道内细菌早期定植形成后,肠道内菌群会保持一个稳定状态,通过这种稳态改变与生理学变化的联系,使利用肠道菌群诊断及治疗疾病成为可能。
闫晓明
张力文
王宗润
王宗美
张云峰
关键词:
肠道菌群
支气管哮喘
儿童
免疫应答
实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价
被引量:6
2014年
目的:建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法,为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法:提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区,依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物,以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品,应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品及待测样本进行分析,建立绝对定量的标准曲线,同时计算出待测样本双歧杆菌浓度;根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度;分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性;重复检测梯度稀释的标准品,用相同浓度标准品的Ct值变异系数(CV)评价反应稳定性。结果:常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp,测序结果正确,成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品;生成的标准曲线R2=0.999,最低检测限度为每个反应1.48×102个拷贝;实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测,各组间每微升1.48×10^3~1.48×10^7个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94%、3.39%、3.54%、3.08%和3.34%。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86(拷贝数·-1湿便)。结论:本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强,且重复性好,适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。
张力文
王宗润
吴秀丽
房明丽
张云峰
关键词:
引物
双歧杆菌
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