孔汉金
- 作品数：30 被引量：84H指数：6
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家肉羊产业技术体系建设项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 将编码小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的基因全长克隆到pBacPAK9载体中,并在昆虫细胞中进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用PPRV阳性血清进行了Western blot鉴定。用Ni-IDA亲和柱对组氨酸融合表达的N蛋白进行了纯化,并对纯化产物进行了理化性质和抗原活性分析。最后以表达的N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,临床检测137份山羊血清并与IDvet公司的商品化PPRV抗体检测试剂盒进行比较。结果表明,制备的PPRV N蛋白抗原在溶液中以单体形式存在,具有非常好的抗原活性。用该蛋白建立的间接ELISA检测方法与IDvet试剂盒符合率为956%。本研究为小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备相关质量标准的建立奠定了基础,同时建立的ELISA抗体检测方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
- 冯向辉陈三民孔汉金杨璐申屠芬琴田新生张丽孙明陈西钊
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白ELISA
- 牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析被引量：2
- 2013年
- 为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性,建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊该病例为牛狂犬病,遗传进化分析表明本研究鉴定的狂犬病毒和2006年及2007年国内狗源狂犬病毒(DQ666306、DQ866121)、猪源狂犬病毒(DQ496219)及人源狂犬病毒(EF556197)的遗传关系较近。本文为研究牛狂犬病毒分子流行病学积累了资料。
- 张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛
- 关键词：狂犬病毒分子特征分析
- 抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）B2L蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的ORFV B2L蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗B2L蛋白单...
- 张克山刘湘涛孔汉金刘永杰尚佑军田宏尹双辉吴锦艳杨顺利陈妍王光祥
- 文献传递
- 羊传染性脓疱病毒感染山羊皮肤成纤维上皮细胞差异表达miRNA分析
- 2020年
- 旨在研究羊传染性脓疱病毒(orf virus,orfv)感染山羊皮肤成纤维细胞(goat skin fibroblasts cell,GSF)对GSF细胞microRNA(miRNA)表达谱影响,探究miRNA在orfv感染过程中的作用及调控机制。分别提取感染和未感染orfv的GSF细胞总RNA,构建miRNA文库,利用高通量测序技术进行miRNA差异表达分析,对差异表达miRNA靶基因进行预测,并进行GO和KEGG分析,随机选取10个差异miRNA进行RT-qPCR验证。结果显示,orfv感染组和未感染GSF细胞组相比共有678个显著差异表达的miRNA(fold change≥1.5),其中,上调表达miRNA有509个,下调表达miRNA有169个,uniq_miRNA的Venn图分析显示,感染组和对照组共有的miRNA仅占8.21%;GO和KEGG分析显示,差异表达miRNA主要参与脂质代谢、受体及细胞因子信号转导等细胞生物学过程,RT-qPCR验证结果与高通量测序结果一致。本研究结果表明,orfv感染GSF细胞对其编码的miRNA有显著影响,获得大量GSF细胞编码的与orfv感染相关的差异miRNA,为进一步从宿主miRNA层面揭示orfv感染和致病机制提供了参考依据。
- 张大俊侯景申超超徐国伟孔汉金成伟伟郑海学刘湘涛张克山
- 关键词：羊传染性脓疱病毒病毒感染
- 抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）B2L蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的ORFV B2L蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗B2L蛋白单...
- 张克山刘湘涛孔汉金刘永杰尚佑军田宏尹双辉吴锦艳杨顺利陈妍王光祥
- 文献传递
- 用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条
- 本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C<Sub>12</Sub>、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PP...
- 陈西钊孙明田克恭吴培星迟立超冯向辉孔汉金申屠芬琴张丽
- 文献传递
- 一种用于小鼠尾部采血的负压装置
- 本实用新型提供一种用于小鼠尾部采血的负压装置，其包括：负压发生装置、连接装置以及血液收集装置，所述的负压发生装置的抽气口通过连接装置与血液收集装置的排气口相连接，而血液收集装置的进气口用于血液收集。本实用新型简单、实用、...
- 张克山孔汉金刘永杰尚佑军
- 文献传递
- 我国一些地区羊衣原体血清流行病学调查分析被引量：13
- 2015年
- 羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60%(12/20)、42.86%(51/119)、52.75%(48/91)、40.13%(122/304)、51.91%(68/131)、30.56%(11/36)、67.74%(21/31)和90%(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重。与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势。绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27%(268/576)和42.28%(74/175),表明前者感染率要高于后者。
- 成伟伟彭靖雯张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊
- 关键词：间接血凝试验血清学调查
- 羊传染病脓疱研究展望
- 羊传染性脓疱是全球范围内影响绵羊和山羊产业最常见的病毒性疾病之一。该病病原是羊口疮病毒,由于其能导致人畜共患以及越来越多的新物种受到该病影响,近年来受到人们广泛关注。在病毒基因组中已发现与宿主细胞因子及其拮抗分子同源的基...
- 孔汉金张克山刘永杰尚佑军吴斌刘湘涛
- 关键词：羊传染性脓疱致病机制
- 文献传递
- 一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用
- 本发明“一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用”涉及小反刍兽疫病毒多肽合成物领域。所述小反刍Nigeria 75/1疫苗株合成肽，其包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的肽段I。所述小反刍野毒株合成肽，其...
- 陈西钊孙明刘巧荣田新生申屠芬琴孔汉金
- 文献传递
