刘一锋
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维替泊芬通过下调Yes相关蛋白表达抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖及侵袭和迁移被引量：3
- 2017年
- 目的探讨维替泊芬对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法选取对数生长期的MDA-MB-231细胞,随机分为对照组和维替泊芬处理组。先采用CCK-8法确定维替泊芬对MDA-MB-231细胞增殖抑制的最低抑制浓度,而后采用4μmol/m L维替泊芬处理MDA-MB-231细胞,采用TranswellTM侵袭实验检测细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用Western blot法检测(0、4、8、12、16)μmol/m L维替泊芬对MDA-MB-231细胞中增殖相关蛋白c-MYC、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Yes相关蛋白(YAP)及其靶基因富半胱氨酸蛋白61(CYR61)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平。结果维替泊芬明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖,且呈剂量依赖性,最低抑制浓度为4μmol/m L。4μmol/m L维替泊芬显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移。维替泊芬下调MDA-MB-231细胞中增殖相关蛋白c-MYC、细胞周期蛋白cyclin D1及YAP、CYR61和CTGF的蛋白表达水平。结论维替泊芬通过下调YAP及其靶基因CYR61、CTGF表达显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭及迁移。
- 蒋玉林刘一锋张志乾杨俊鸿叶相森靳倩妮陈婷梅
- 关键词：维替泊芬MDA-MB-231细胞增殖迁移
- 沉默PKM2对乳腺癌他莫昔芬耐药MCF-7细胞系侵袭及迁移的影响
- 2016年
- 目的探讨PKM2下调对乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药MCF-7细胞系侵袭、迁移的影响。方法以浓度梯度法诱导获得乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7R);细胞增殖与凋亡试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞PKM2的表达;将表达针对PKM2的shRNA慢病毒干扰载体感染耐药细胞系,RT-q PCR、Western blot验证干扰效果,分别用Transwell侵袭实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7R细胞对他莫昔芬的抵抗能力显著增强(P<0.01),PKM2的表达水平明显升高(P<0.01)。稳定干扰PKM2的耐药细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P<0.01),PKM2干扰后可明显抑制MCF-7R细胞的侵袭、迁移能力(P<0.01)。结论 MCF-7R细胞中PKM2表达明显高于MCF-7细胞,沉默PKM2可以抑制MCF-7R细胞的侵袭和迁移能力。
- 季飞虎王念钟昌莉蒋玉林刘一锋张志乾靳倩妮陈婷梅
- 关键词：乳腺肿瘤他莫昔芬迁移
- 果糖-1,6-二磷酸酶1过表达抑制他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞迁移并促进细胞凋亡被引量：1
- 2016年
- 目的 :探讨过表达果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP 1)基因对他莫昔芬耐药性人乳腺癌MCF-7R细胞迁移和凋亡的影响。方法 :首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人乳腺癌亲本敏感细胞MCF-7和他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中FBP1 mRNA和蛋白的表达水平。然后,采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至耐药细胞MCF-7R中,再应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测FBP1 mRNA和蛋白的表达水平,以验证FBP1基因过表达效果。接着,倒置光学显微镜下观察FBP1过表达后MCF-7R细胞的形态学变化;FCM法和细胞划痕愈合实验分别检测细胞凋亡及迁移能力的变化;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax以及上皮-间质转化标志物E-cadherin和vimentin的表达变化。结果 :对他莫昔芬耐药的人乳腺癌细胞MCF-7R中FBP1 mRNA和蛋白的表达水平均比其亲本细胞MCF-7明显降低(P值均<0.01)。FBP1过表达重组质粒转染后,MCF-7R细胞中FBP1 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P值均<0.01),MCF-7R细胞形态由间质细胞样向上皮细胞样转变,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),迁移能力则明显降低(P<0.01)。FBP1过表达的MCF-7R细胞中Bcl-2和vimentin蛋白的表达水平明显下降(P值均<0.01),Bax和E-cadherin蛋白的表达水平则明显升高(P值均<0.01)。结论 :FBP1基因过表达可明显抑制人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R的迁移和上皮-间质转化,并通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来促进肿瘤耐药细胞的凋亡。
- 刘一锋王念季飞虎钟昌莉蒋玉林张志乾杨俊鸿魏兰苏敏黄云秀靳倩妮陈婷梅
- 关键词：乳腺肿瘤上皮-间质转化细胞凋亡
- 瘦素通过下调FBP1基因表达促进人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231细胞增殖并抑制细胞凋亡被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨瘦素(leptin)对人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,及其可能的分子作用机制。方法:应用瘦素(200 ng/mL)处理人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231细胞后,分别采用CCK-8法和FCM法检测BT-474和MDA-MB-231细胞的增殖及凋亡能力;蛋白质印迹法检测增殖相关蛋白c-Myc和cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测经瘦素(200 ng/mL)处理后,BT-474和MDAMB-231细胞内果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)mRNA和蛋白表达水平的变化。然后,采用脂质体转染法,将携带有FBP 1基因的重组质粒分别转染至BT-474和MDA-MB-231细胞中,随后行瘦素(200 ng/mL)处理,再应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测FBP1 mRNA及其蛋白的表达水平,以验证FBP 1基因过表达的效果。采用CCK-8法再次检测BT-474和MDA-MB-231细胞的增殖能力的变化,蛋白质印迹法检测增殖相关蛋白c-Myc和cyclin D1表达水平的变化,FCM法检测细胞凋亡率的变化,并采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平的变化。结果:经瘦素(200 ng/mL)处理后,BT-474和MDA-MB-231细胞的增殖能力明显增强(P值均<0.01);增殖相关蛋白c-Myc和cyclin D1的表达水平明显升高(P值均<0.01);同时,细胞凋亡率明显减少(P值均<0.01);凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平明显升高(P值均<0.01),Bax表达水平明显降低(P值均<0.01)。2株细胞中FBP1 mRNA及蛋白的表达水平均较未用瘦素处理前明显下调(P值均<0.05)。FBP1过表达的BT-474和MDA-MB-231细胞经瘦素处理后,FBP1 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P值均<0.01),并抑制BT-474和MDA-MB-231细胞的增殖能力,促进细胞的抗凋亡能力(P值均<0.01)。结论:瘦素可促进人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231细胞的增殖并抑制2株细胞的凋亡,其机制可能与下调FBP 1基因表达有关。
- 刘一锋蒋玉林张志乾杨俊鸿靳倩妮叶相森陈婷梅
- 关键词：瘦素细胞增殖细胞凋亡
- 脂肪血制备的去白细胞悬浮红细胞储存期代谢特性研究被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨脂肪血制备的去白细胞悬浮红细胞在储存期的主要代谢途径转换,为脂肪血制备的悬浮红细胞储存提供参考。方法:选择脂肪血和正常全血各10 U,制备成去白细胞悬浮红细胞,在制备当天(d 0)、d 14、d 35分别取样,采用UPLC-MS/MS检测红细胞内的代谢物。采用Mann-Whitney U检验分析2组标本糖酵解途径和磷酸戊糖途径代谢物的差异,分析脂肪血制备的悬浮红细胞储存期的代谢途径变化。结果:d 0实验组红细胞内代谢物葡萄糖、腺嘌呤、丙酮酸、GSH、GSSG和烟碱酰胺水平均高于对照组(P<0.05)。d 14实验组红细胞中葡萄糖、丙酮酸和GSH水平低于对照组(P<0.05),腺嘌呤、烟碱酰胺和GSSG水平高于对照组。D 35实验组红细胞中葡萄糖水平低于对照组(P<0.05),腺嘌呤、烟碱酰胺水平高于对照组(P<0.05),两组之间的丙酮酸、GSSG和GSH水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与正常红细胞相比,脂肪血红细胞储存期内能量代谢减弱,磷酸戊糖途径增强。
- 杨俊鸿杨俊鸿蒋玉林刘一锋张志乾王念王念季飞虎叶相森陈婷梅
- 关键词：脂肪血红细胞代谢途径
- 颗粒蛋白前体通过促进细胞增殖和抗凋亡增强乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药性被引量：1
- 2018年
- 目的 :探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药性产生过程中的作用机制。方法 :用4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,OHT)处理乳腺癌细胞MCF-7和T47D以及他莫昔芬耐药性细胞MCF-7R和T47DR后,CCK-8法检测OHT对各细胞的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)。蛋白质印迹法检测各细胞中C-myc、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达水平,CCK-8法检测各细胞的增殖能力,FCM法检测各细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各细胞中PGRN的mRNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将特异性靶向PGRN基因的siRNA转染至他莫昔芬耐药性细胞MCF-7R和T47DR后,采用蛋白质印迹法检测PGRN、C-myc、Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达水平的变化。进一步使用OHT处理干扰PGRN表达后的MCF-7R和T47DR细胞,再采用FCM法检测细胞凋亡的变化。结果 :诱导获得的他莫昔芬耐药性人乳腺癌细胞株MCF-7R和T47DR的IC50值明显高于敏感细胞MCF-7和T47D(P值均<0.001)。耐药细胞MCF-7R和T47DR的增殖速度明显高于MCF-7和T47D细胞(P值均<0.01),凋亡率明显低于MCF-7和T47D细胞(P值均<0.01),增殖相关蛋白C-myc和Cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平明显升高(P值均<0.01),PGRNmRNA和蛋白水平也明显升高(P值均<0.05)。干扰PGRN基因表达后,耐药细胞MCF-7R和T47DR中C-myc、Cyclin D1和Bcl-2的表达水平明显降低(P值均<0.01),而OHT处理后细胞凋亡数量明显增多(P值均<0.01)。结论 :PGRN在人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中明显高表达,干扰PGRN基因表达可以增强乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。
- 叶相森蒋玉林刘一锋张志乾杨俊鸿靳倩妮甘德露岳姝君钱胡孙陈婷梅
- 关键词：乳腺肿瘤RNA干扰他莫昔芬
