黄飞
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划项目天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类表皮生长因子受体-2单链抗体抑制高表达人类表皮生长因子受体-2肿瘤生长被引量：4
- 2017年
- 目的探讨抗人类表皮生长因子受体-2（Her-2）单链抗体（scFv）抑制高表达Her-2的肿瘤细胞生长增殖，探讨其应用于Her-2阳性肿瘤治疗的可行性。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术从携带Her-2-scFv片段的质粒pUC57-Her-2-scFv获得目的基因，双酶切法将目的基因Her-2-scFv插入质粒载体pET28a构建表达质粒，转化入Rosetta大肠杆菌诱导表达，获得目的蛋白，并复性、纯化。Western blot证实表达。噻唑蓝（MTT）法检测目的蛋白对肿瘤细胞T6-17增殖的抑制作用。将肿瘤细胞T6-17在裸鼠皮下成瘤，观察抗Her-2单链抗体抑制肿瘤细胞生长。结果经基因测序鉴定，重组质粒pET28a-Her-2-scFv构建成功。转化入Rosetta菌表达并分离纯化，可获得纯度约为90%的目的蛋白。MTT法测定发现，抗Her-2-scFv组对T6-17细胞的的生长抑制率为33.52%，曲妥珠单抗治疗组的生长抑制率为34.79%，两组比较差异无统计学意义（P=0.429），而与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P=0.000）。进而检测Her-2-scFv对裸鼠肿瘤模型生长抑制作用发现，Her-2-scFv各浓度治疗组均表现出抑瘤效应，100、250、500 ng/kg组的抑瘤率分别为33.7%、27.2%、63.3%，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P=0.027、0.035、0.000）。赫赛汀组抑瘤率为70.2%，与500 ng/kg组比较，差异无统计学意义（P=0.643）。结论抗Her-2单链抗体在体内外均可显著抑制Her-2阳性肿瘤细胞T6-17的生长增殖。
- 周扬刘宁波黄飞张国敬李若彤李卫东付蔚华
- 关键词：人类表皮生长因子受体-2单链抗体
- 合并高脂血症的胃癌患者PGE2 VEGF表达水平和临床病理特征的相关研究被引量：8
- 2016年
- 目的:比较合并高脂血症的胃癌患者与未合并高脂血症患者的血清前列腺素E2(ptodyshlsnfin E2,PGE2)、血清血管内皮生长因子(voscular endothelial growth factor,VEGF)水平、胃癌组织VEGF表达水平和肿瘤临床病理特征的差异,探讨高脂血症对胃癌进展的影响。方法:将全部天津医科大学总医院2014年3月至2014年12月102例胃癌患者分为两组,合并高脂血症患者组49例,不合并高脂血症患者组53例。应用酶联免疫吸附测定法及免疫组织化学法测定102例胃癌患者血清PGE2、VEGF的浓度及肿瘤组织中VEGF的表达水平。结果:与不合并高脂血症的患者相比,合并高脂血症的胃癌患者,其血清PGE2、VEGF浓度以及胃癌组织中VEGF的表达水平均有明显升高(P<0.05);且胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移枚数、TNM分期差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:合并高脂血症的胃癌患者可能通过上调PGE2和VEGF的表达促进胃癌的进展。
- 张骜刘嘉黄飞周扬李卫东付蔚华刘彤
- 关键词：胃癌高脂血症前列腺素E2临床病理特征
- CD40单链抗体影响辅助性T淋巴细胞平衡增强抗肿瘤免疫的研究被引量：2
- 2018年
- 目的探讨CD40单链抗体（CIMOScFv）对辅助性T淋巴细胞（Thl）平衡的影响及其发挥抗肿瘤作用机制。方法根据已获得的CIMOScFv基因片段，构建pET28a-CD40ScFv重组质粒，将重组质粒转化后诱导表达获得功能性CIMOScFv蛋白。体外诱导培养树突状细胞（DC）检测CD40ScFv对其活化成熟的促进作用，与CD4^T淋巴细胞共培养后，检测共培养液中Thl／Tlr2比例。构建小鼠荷瘤模型，予CIMOScFv治疗并设立对照，观察并记录肿瘤体积变化，检测肿瘤微环境中白细胞介素-12（IL-12）浓度和Thl／Th2比例。结果成功构建pET28a-CD40ScFv重组质粒及诱导表达CIMOScFv。不同条件激活的DC培养液中CIMOScFv组DC活化程度显著高于PBS组（CD80：P=0．001，CD86：P=0．000），同时DC培养液上清中CIMOScFv组IL-12浓度为（674．37±73．59）pg／ml，显著高于PBS组（309．45±40．91）pg／ml（P=0．001），而与阳性对照组比较差异无统计学意义（P=0．737）。DC与CD4^＋T细胞混合培养液中CD40ScFv实验组的Thl／Th2比值（9．98±1．78）显著高于PBS组（2．75±0．49）（P=0．003），而与肿瘤坏死因子（TNF）-α组比较差异无统计学意义（P=0．872）。小鼠肿瘤微环境中CD40ScFv组IL-12的浓度[（396．27±48．13）pg／m1]显著高于Ns组[（79．51±14．97）pg／m1]（P=0．000），同时CIMOScFv组的Thl／Th2细胞比值为6．32±0．87，显著高于NS组（1．79±0．38）（P=0．000），而与激动型CD40mAb组比较差异无统计学意义（P=0．400）。结论构建pET28a-CIMOScFv重组质粒经诱导后可表达功能性CD40ScFv蛋白。CD40ScFv在体外通过促进DC的活化与成熟，诱导Thl细胞的极化，调整Thl／Th2比例，进而发挥抑制肿瘤增殖的作用。
- 鲁遥恒王吉黄飞吕文浩王曦付蔚华李卫东
- 关键词：肿瘤微环境辅助性T淋巴细胞树突状细胞
- 激动性CD40抗体通过调节Th1/Th2平衡增强抗肿瘤作用的机制研究被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨激动性CD40抗体中单链抗体(CD40Sc Fv)和单克隆抗体(CD40m Ab)抑制小鼠乳腺癌细胞生长情况及对癌组织中Th1和Th2平衡的改变,分析通过调节Th1/Th2平衡达到抗肿瘤作用的机制。方法:将含CD40Sc Fv基因片段的重组质粒转化至Rosetta大肠杆菌中,诱导表达并经纯化后获得有功能的CD40Sc Fv蛋白,行SDS-PAGE和Western blot检测。体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞,在Balb/C小鼠皮下成瘤建立模型,分为CD40Sc Fv组、CD40m Ab组和生理盐水组(NS组),分别给予CD40Sc Fv、CD40m Ab和生理盐水,观察各组小鼠肿瘤体积的变化。取出瘤体组织,ELISA法检测肿瘤组织上清中IL-12的浓度。提取肿瘤组织浸润淋巴细胞(TILs),应用流式细胞技术检测TILs中Th1与Th2的比例。结果:诱导表达的CD40Sc Fv鉴定表达成功,分子大小约为27KDa,蛋白纯化后经BCA测定浓度为1.12 mg/mL。CD40Sc Fv组与CD40m Ab组肿瘤大小分别为(3.044±0.239)cm^3与(2.749±0.261)cm^3,均小于NS组的(3.933±0.326)cm^3,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD40Sc Fv组、CD40m Ab组肿瘤组织中IL-12浓度分别为(396.27±48.13)pg/mL、(457.63±58.37)pg/mL,均显著高于NS组的(79.51±14.97)pg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD40Sc Fv组与CD40m Ab组的Th1/Th2细胞比值分别为6.32±0.87与5.54±0.71,均显著高于NS组的1.79±0.38,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:激动性CD40抗体在体内通过调节Th1与Th2的比例,发挥抑制肿瘤生长的作用,其中通过促进DC活化后分泌IL-12是影响肿瘤微环境中Th1/Th2平衡的重要机制之一。
- 郑凯源黄飞陆礼张骜付蔚华
- 关键词：肿瘤微环境辅助性T淋巴细胞
- 激动型CD40单克隆抗体体外抑制结肠癌细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2017年
- 目的 探讨激动型CD40单克隆抗体在体外对结肠癌细胞增殖的抑制作用.方法 树突状细胞（DCs）经结肠癌冻融抗原致敏后予以不同条件激活,分为激动型CD40单克隆抗体组、阴性对照组及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）阳性对照组,诱导培养至第7天,用流式细胞仪检测各组DCs表面分化相关抗原CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,酶联免疫吸附测定法检测DCs培养液上清中白细胞介素-12（IL-12）的质量浓度,噻唑蓝比色法检测DCs体外刺激T淋巴细胞增殖的能力,进而检测DCs所诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对人结肠癌细胞HCT116的杀伤作用.结果 与阴性对照组相比,激动型CD40单克隆抗体组活化的DCs表面抗原CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达率均显著升高（均P〈0.05）,DCs上清中IL-12的质量浓度亦显著升高（（716.80±53.43） pg/ml比（405.51±12.17） pg/ml,P〈0.05）,活化的DCs具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力（刺激指数2.006 2±0.438 3比1.365 0±0.209 8,P〈0.05）,活化的DCs所诱导的CTL对HCT116细胞具有更强的杀伤作用（抑制率（66.08±0.41）％比（46.60±1.10）％,P〈0.05）;而与TNF-α阳性对照组相比,其差异均无统计学意义（均P〉0.05）.结论 激动型CD40单克隆抗体在体外可促进DCs的活化与成熟,进而诱导肿瘤特异性CTL的产生,从而抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖.
- 黄飞崔建功张骜周扬李卫东付蔚华
- 关键词：CD40树突状细胞结肠癌
