李柔 作品数:9 被引量:25 H指数:4 供职机构: 河北北方学院 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 河北省中医药管理局科研计划项目 河北省教育厅项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
转化生长因子-β1和丹参酮ⅡA联合诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化 被引量:2 2016年 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)与丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)联合诱导对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化为心肌样细胞的影响。方法采用全骨髓贴壁法从10只SD大鼠四肢骨中分离、培养BMSCs,流式细胞术对培养的细胞进行鉴定。对第2代BMSCs作定向诱导,根据加入诱导剂的不同分为TGF-β1组、tanshinoneⅡA组、两者联合诱导组及实验对照组(不加任何诱导剂)。诱导72h后更换为常规培养基继续培养,相差显微镜观察培养细胞的形态学变化;各组培养4周后,应用免疫细胞化学染色法检测原肌球蛋白(TPM)、缝隙连接蛋白43(Cx43)以及心肌肌钙蛋白I(c Tn I)的表达情况;实时定量PCR(Real-time PCR)法检测各组BMSCs在诱导培养的第1、2、4周心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5的表达情况;透射电子显微镜观察分化细胞的超微结构变化。结果实验对照组细胞TPM、Cx43及c Tn I均为弱阳性或阴性表达。与实验对照组相比,TGF-β1组、TanshinoneⅡA组及两者联合诱导组BMSCs以上各标记物的阳性表达均明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。其中,两者联合诱导组各标记物的阳性表达均显著高于TGF-β1及TanshinoneⅡA单独诱导组。Real-time PCR结果显示,在诱导第1周时TGF-β1组、TanshinoneⅡA组及两者联合诱导组GATA-4及Nkx2.5基因表达均最强,随后表达减弱至不表达。1周时,联合诱导组GATA-4 mRNA相对表达量是实验对照组的3.7倍,Nkx2.5 mRNA相对表达量是实验对照组的2.9倍,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。透射电子显微镜结果显示,各诱导组均可见分化的细胞呈杆状,胞核卵圆形,位于细胞中央,胞质中可见平行排列的肌丝、粗面内质网和线粒体等细胞器。结论 TGF-β1、tanshinoneⅡA均可分别及联合诱导BMSCs获得心肌分化表型,且两者联合诱导效果优于单一诱导。 吕洋 刘博 王海萍 刘源 孙微 李柔 陈晓依关键词:骨髓间充质干细胞 转化生长因子-Β1 流式细胞术 实时定量聚合酶链反应 成纤维生长因子-2联合骨形态发生蛋白-2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化 被引量:4 2018年 目的:观察纤维生长因子-2(FGF-2)与骨形态发生蛋白-2(BMP-2)单一及联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的效果。方法:从SD大鼠骨髓中分离提取BMMSCs,细胞传至第2代时加入诱导物质,分组(FGF-2诱导组、BMP-2诱导组、联合诱导组及空白对照组)培养。应用免疫细胞化学法对培养至第28天时4组细胞中cTnT、desmin、α-actin、p38mapk蛋白表达情况进行检测;应用RT-PCR法对4组细胞中GATA-4、Nkx2.5及α-MHC mRNA的表达量进行测定。结果:常规养至第28天时,联合诱导组细胞中cTnT、desmin、α-actin和p38mapk蛋白表达的阳性率依次为(30.14±8.66)%、(45.30±6.96)%、(60.95±7.73)%和(43.50±7.32)%,且FGF-2诱导组、BMP-2诱导组各指标的阳性率均低于联合诱导组(P<0.05)。FGF-2诱导组、BMP-2诱导组细胞中Nkx2.5及GATA-4 mRNA的表达量在第7、14、28天均呈现"高-低-高"的变化趋势;而联合诱导组中以上两种基因的表达量呈现"低-高-高"的表达趋势;且第28天时联合诱导组中以上两种基因的表达量明显高于单一诱导组(P<0.05);各组细胞均未见α-MHC mRNA表达。结论:BMMSCs可在FGF-2与BMP-2单一及联合诱导下发育为心肌样细胞,且两者联合诱导效果更佳。 孙微 王海萍 吕洋 李柔 陈晓依关键词:骨形态发生蛋白-2 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 肿瘤转移抑制相关基因1与肿瘤关系的研究进展 被引量:2 2017年 肿瘤是威胁人类生命的重要疾病之一,而转移则已成为肿瘤的重要致死原因,因此,与肿瘤转移相关的诊断、治疗及预后判断具有重要意义。肿瘤转移抑制相关基因1(TMSG-1),又称为人源性长寿保障基因2,是近年新发现的一种重要肿瘤转移抑制相关基因,其主要功效是正性调节细胞凋亡以及负性调节肿瘤细胞的侵袭及转移。多种肿瘤的发展均与TMSG-1基因的表达相关,尽早将其影响肿瘤发生、发展的机制研究透彻,对肿瘤的监测和治疗具有深远影响。 孙微 李柔 陈晓依 刘博 吕洋关键词:肿瘤转移 ASPP2及P16^(INK4a)在食管癌中的表达及其与凋亡的关系 被引量:3 2017年 目的探讨ASPP2、P16^(INK4a)在食管癌的表达与患者临床病理特征及凋亡的相关性。方法 SP免疫组化染色法检测112例食管癌及31例正常食管黏膜ASPP2、P16^(INK4a)的表达,分析它们与患者临床病理特征的相关性;在上述蜡块中随机选取37例食管癌及12例正常食管黏膜,采用原位缺口末端标记技术(TUNEL)检测上皮细胞的凋亡情况,分析凋亡阳性率与以上二标记物在食管癌表达的相关性。结果 ASPP2、P16^(INK4a)在食管癌与正常食管黏膜的表达差异有统计学意义,且二者异常表达均与食管癌组织学分级、淋巴结转移相关(P<0.05)。TUNEL检测显示正常食管黏膜与食管癌的凋亡阳性率差异有统计学意义,且其与ASPP2、P16^(INK4a)在食管癌的表达相关(P<0.05)。结论 ASPP2、P16^(INK4a)参与食管癌发生、发展及凋亡等过程,联合检测二者可辅助食管癌诊断并指导临床治疗。 李凤玉 王丽梅 魏淑霞 吕洋 李秀娟 李柔关键词:食管癌 ASPP2 P16INK4A 免疫组织化学 凋亡 食管癌预后相关肿瘤标记物研究进展 2017年 食管癌是常见恶性肿瘤,预后差,随着分子生物学的发展,已发现多种肿瘤标记物与食管癌的发生、发展及预后密切相关。综述了食管癌预后相关肿瘤标记物的研究进展,并探讨了食管癌相关分子生物学特点。 陈晓依 孙微 李柔 刘博 吕洋关键词:食管癌 肿瘤标记物 S期激酶相关蛋白2 埃兹蛋白 微小RNA FGF-2与TGF-β1联合诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化 被引量:6 2017年 目的探讨FGF-2与TGF-β1单独及联合诱导对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法体外分离培养SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定其表面抗原。分组诱导:A组(FGF-2)、B组(TGF-β1)、C组(FGF-2+TGF-β1),D组(空白对照)。镜下观察细胞形态改变;免疫细胞化学染色法检测Desmin、α-sarcomeric actin、cTnI的表达;实时荧光定量PCR法检测GATA-4、Nkx2.5的表达。结果 BMSCs表面抗原CD90、CD29、CD45的阳性率分别为84.7%、86.5%、0.3%。诱导后,C组细胞以梭形及类长柱形为主,出现类肌管样结构;蛋白的阳性细胞数最多(P<0.05);GATA-4、Nkx2.5的表达量高于其余两组(P<0.05)。结论 FGF-2与TGF-β1均可将BMSCs诱导为心肌样细胞,但两者联合诱导效果更佳。 李柔 王海萍 吕洋 孙微 陈晓依关键词:骨髓间充质干细胞 FGF-2 TGF-Β1 心肌细胞 PFT-α与BMP-2联合诱导大鼠BMMSCs分化为心肌样细胞 被引量:4 2018年 目的探讨p53抑制剂(PFT-α)与骨形态发生蛋白2(BMP-2)联合诱导对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法分离大鼠BMMSCs进行培养、传代及纯化,分别应用PFT-α、BMP-2及两者联合对第2代BMMSCs定向诱导,不加诱导剂为对照组。倒置显微镜下观察并记录对数增殖期细胞的形态变化;流式细胞计数法鉴定BMMSCs表面联合标记物;免疫组化法检测c Tn I、Cx43及TPM的表达;免疫荧光检测技术对c Tn I和Cx43进行荧光标记;透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。结果经诱导后的BMMSCs以梭形为主,细胞体积变大。CD45、CD29和CD90的阳性率分别为0.3%、86.5%和84.7%。诱导组细胞的c Tn I、Cx43及TPM均呈阳性表达,对照组为阴性。诱导组细胞胞质内Cx43免疫荧光染色表达呈红色,c Tn I则呈绿色,胞核椭圆位于细胞中央,胞质内可见平行排列的肌丝、线粒体和糖原等。结论 PFT-α和BMP-2均可单独诱导BMMSCs分化为心肌样细胞,两者联合应用更加高效、安全。 陈晓依 王浩宇 吕洋 王海萍 孙微 李柔关键词:骨髓间充质干细胞 PFT-Α BMP-2 心肌细胞 Aspp2与肿瘤相关性的研究 被引量:2 2017年 p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating of p53 2,Aspp2)是p53凋亡刺激蛋白家族(apoptosis stimulating of p53,Aspp)中的重要成员。作为一个重要的抑癌基因,Aspp2常与p53结合,对肿瘤产生抑制作用。此外,基因启动的甲基化修饰、部分转录因子的激活作用等也能调节Aspp2的表达,从而对多种肿瘤产生不同程度的影响。本文对Aspp2基因与多种肿瘤相关性的研究作一综述。 李柔 孙微 陈晓依 刘博 吕洋关键词:ASPP2 肿瘤 P53