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朱胜玲
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
供职机构:
复旦大学生命科学学院
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发文基金:
国家科技重大专项
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
粟海波
复旦大学生命科学学院
朱琳
复旦大学生命科学学院
孔聪
复旦大学生命科学学院
黄琪
复旦大学生命科学学院
王洪海
复旦大学生命科学学院
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徐颖
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朱琳
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粟海波
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朱胜玲
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中国防痨杂志
年份
1篇
2016
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结核分枝杆菌新型抗原Rv3400的免疫原性研究
被引量:4
2016年
目的用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)特异性抗原Rv3400联合弗氏不完全佐剂(incom-pleteFreund’s adjuvant,IFA)构建结核亚单位疫苗(Rv3400-IFA),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应。体外用抗原Rv3400感染巨噬细胞RAW264.7并评估其免疫应答。方法PCR扩增基因Rv3400,构建重组质粒pET28a(+)-Rv3400,转人大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv3400蛋白。用抗原Rv3400、阳性对照脂多糖(1ipop01ysaccharides,LPS),分别刺激小鼠巨噬细胞RAw264.7,阴性对照为未刺激的巨噬细胞,流式细胞术检测细胞表面分子表达,收集细胞培养上清,ELISA检测细胞因子的分泌。另一方面纯化的Rv3400蛋白与IFA充分乳化构建亚单位疫苗免疫小鼠;C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为3组,分别为实验组Rv3400组、阳性对照组Rv3425组、阴性对照组IFA组,每组5只,每2周1次、共免疫3次。分别采用酶联免疫斑点检测技术(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果(1)成功克隆表达并纯化结核分枝杆菌特异性抗原Rv3400。(2)体外细胞实验结果显示:Rv3400抗原刺激巨噬细胞,其表面分子CD80、CD86、CD40、MHCII表达量显著提高,阳性细胞比率[分别由未刺激的(34.70±2.40)%、(31.25±18.31)%、(41.80±6.01)%、(44.30±0.44)%提高至1μg/mlRv3400抗原刺激后的(90.45±7.71)%、(90.10±4.10)%、(89.97±7.79)%、(85.13±5.12)%];能促进细胞分泌高水平的肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),分别达(49217.0±390.61)pg/ml、(1783.4±51.18)pg/ml。(3)免疫小鼠后,ELISPOT结果显示:实验组Rv3400组小鼠分泌INF-7的斑点形成细胞(spotfo
朱琳
徐颖
孔聪
粟海波
黄琪
朱胜玲
王洪海
关键词:
分枝杆菌
结核
亚单位疫苗
细胞免疫
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