阮仁余
- 作品数：2 被引量：23H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所卫生部天然药物生物合成重点实验室更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 中国红豆杉细胞色素P450还原酶的基因克隆、表达与活性分析被引量：17
- 2010年
- 细胞色素P450还原酶(Cytochrome P450 reductase,CPR)是细胞色素P450羟基化酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。文章从中国红豆杉(Taxuswallichiana var. Chinensis)愈伤组织细胞中克隆CPR基因(TchCPR),TchCPR含有一个2154bp碱基的阅读框,编码717个氨基酸残基;在氨基酸水平上它与裸子植物细胞色素P450还原酶的同源性(>82%)高于其他被子植物的细胞色素P450还原酶(<74%)。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达了全长和从N-端截短不同数目氨基酸残基的6个融合肽段,经亲和层析纯化,分析了表达的不同长度融合蛋白的电子传递效率。结果表明截短长度大于61个氨基酸残基肽段的胞色素P450还原酶都能够诱导表达,在表达水平上无显著差异,而截短61个氨基酸的CPR融合蛋白电子传递的催化活性(1.6057nmol Cyt Cred/min/μg TchCPR融合蛋白)高于其他4个融合蛋白。
- 阮仁余孔建强郑晓东张书香秦成蕴程克棣王建明王伟
- 关键词：中国红豆杉
- 甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1与人CPSF30结合拮抗剂筛选模型的建立及药物筛选被引量：6
- 2010年
- 利用酵母双杂交技术研究甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1和人切割与多聚腺苷酸化特异因子30kDa亚基(CPSF30)的相互作用,构建了一个酵母模型用于筛选NS1和CPSF30相互作用的拮抗剂,从而为筛选抗甲型H1N1流感病毒药物奠定基础。采用连续重叠PCR技术克隆得到H1N1流感病毒NS1基因。提取人HeLa细胞RNA,通过RT-PCR克隆得到人CPSF30基因。将NS1基因克隆到表达载体pGBKT7中获得诱饵载体pGBKNS1,将CPSF30基因克隆到载体pGADT7中获得捕获载体pGADCPSF;将pGBKNS1和pGADCPSF共转入酿酒酵母AH109,获得重组酿酒酵母AH109[pGADCPSF+pGBKNS1]。利用该模型筛选了30余种中成药,发现双黄连口服液等4种中成药能抑制NS1和CPSF30之间的相互作用。
- 孔建强沈君豪黄勇阮仁余项斌郑晓东程克棣王伟
- 关键词：H1N1流感病毒中药筛选
