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上海口岸管道水中军团菌污染状况及其细胞内生长能力研究被引量：3: 2014年; 目的了解口岸公共场所管道水军团菌污染状况和细菌在细胞内的生长能力.方法采集上海市口岸管道水132份,采用GVPC（军团菌选择性培养基）培养计数法对水样中军团菌进行定性和定量分析.用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究.结果平板培养法检测管道水中军团菌阳性率为18.94％,25份培养阳性标本中军团菌定量数值为50～1 320菌落形成单位（CFU）/L.分离的25株军团菌中17株是嗜肺军团菌;其中血清1型2株、8型13株、7型1株、5型1株;其余8株为米克戴德军团菌.细胞内生长实验结果显示,4个血清型的嗜肺军团菌均具有很高的细胞内生长能力,而米克戴德军团菌细胞内生长能力较低.结论管道水中军团菌污染率和含菌量较高,且菌株具有很高的细胞内生长能力,提示其具有一定致病性,有引起军团菌病的危险,应采取相应消毒和预防措施.; 任红宇田桢干周海健关红邵祝军秦天; 关键词：军团菌嗜肺军团菌

四种检测方法用于上海市口岸管道水军团菌存在状况调查的研究: 2014年; 目的比较传统的平板培养法、普通聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）、实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR,real-time PCR）和荧光染料叠氮溴化乙锭（ethidium monoazide,EMA）结合荧光定量PCR的方法（EMA-荧光定量PCR）对管道水中军团菌的检测效果。方法于2010年对上海市2个口岸管道水进行采样,共采集132份。分别采用传统的平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR对水样中军团菌进行定性和/或定量分析。结果对132份管道水标本进行军团菌定性检测,平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检出军团菌污染率分别为18.9%、20.5%、24.2%和24.2%。3种定量方法（平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR）对阳性标本中军团菌定量数值分别为50~1320菌落形成单位/升（cfu/L）、20~13 085基因单位/升（GU/L）和10~4480 GU/L。对于132份水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值大小差异有统计学意义（χ2=193.6,P〈0.01）,其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。结论上海市口岸管道水中军团菌污染率和含菌量高。荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测管道水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。; 任红宇田桢干周海健关红秦天邵祝军; 关键词：军团菌实时荧光定量聚合酶链反应

利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用: 2013年; 目的改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。方法使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。结果去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。结论该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。; 关红秦天周海建任红宇段永翔许欣邵祝军; 关键词：质粒脉冲场凝胶电泳军团菌

对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨被引量：4: 2013年; 目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制。方法对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(K-B法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位。结果药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000bp质粒上。结论肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP。; 关红曹霞陈蕊周涛黄兴隆许欣裴晓方; 关键词：肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶金属Β-内酰胺酶质粒

MLVA方法在军团菌分子分型中的应用评价被引量：3: 2012年; 目的探讨MLVA方法在军团菌分型中的可应用性。方法选用文献报道的9个军团菌VNTR位点,对我国环境水中分离的81株Lp1型军团菌菌株和2株参考菌株进行分子分型研究,并与PFGE和SBT分型结果进行了比较。结果 81株分离菌株9个VNTR位点的等位基因型别数分别为6,3,4,2,3,3,2,4和7,其中部分菌株的某些位点无扩增产物或产物为非目的片断。7个位点PCR产物具有重复单元;Lpms3位点PCR产物无重复单元;Lpms31位点部分菌株PCR产物有重复单元,另一些菌株无重复单元。对于具有重复单元的序列,不同菌株间以及同一菌株内各重复单元的序列变异均较大,3个位点存在不完整的重复单元。根据8个位点的PCR产物电泳结果,81株Lp1型分离菌株分为19个MLVA型。通过PFGE和SBT方法,81株Lp1型分离菌株分别分为46种PFGE带型和21种ST型。结论 MLVA方法的分型能力不及PFGE方法,而与SBT方法分型能力相当。但是,MLVA方法操作简单、成本低廉,而且可对培养阴性的标本进行分型,因此,该方法适合在基层推广应用。; 朱兵清任红宇周海健关红邵祝军; 关键词：军团菌嗜肺军团菌分子分型 MLVA

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关红

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