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生精细胞发育相关lncRNA的研究进展被引量：2: 2016年; 精子发生包括精原细胞的增殖分化、精母细胞减数分裂及圆形精子细胞形态学改变。每一个过程都受到各种转录因子、基因或信号通路的高度调控。近年来，由于深度测序技术的进步，使我们对转录复杂性的认识从以mRNA为中心跳跃到一个高度保守的非翻译转录组——非编码RNA（ncRNA）。; 夏静郑英; 关键词：生精上皮精子发生

雄性小鼠联会复合体的研究进展被引量：1: 2016年; 联会复合体（synaptonemal complex，SC）是同源染色体之间具有三级结构的阶梯状聚合亚蛋白复合体，大部分由减数分裂特异性蛋白组成，联会复合体的装配开始于第一次减数分裂前期早期。; 申雪沂牛长敏郭佳倩马海涛夏静郑英; 关键词：联会复合体减数分裂精子发生

mTOR信号通路在生精细胞发育中的作用: 2016年; 精子发生是指精原细胞经过一系列分裂分化演变为精子的过程,包括精原干细胞的增殖及其子细胞分化、精母细胞的减数分裂和精子形成三个阶段。许多研究表明mTOR信号通路参与精子发生的各个阶段。本文主要就mTOR信号通路在生精细胞发育的不同阶段中的作用做一综述。; 夏静牛长敏马海涛申雪沂王建军郑英; 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白生精细胞信号通路精子发生

兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用被引量：8: 2017年; 目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。; 马海涛郭佳倩夏静牛长敏申雪沂孙红亚郑英; 关键词：多克隆抗体

兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)多克隆抗体的制备与应用被引量：3: 2018年; 目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)的多克隆抗体并检测Tex33在小鼠精子发生过程中的表达情况。方法以成年小鼠睾丸组织c DNA为模板,PCR扩增Tex33基因可读框序列,最终将PCR产物插入p ET-30a载体,构建p ET-30a-Tex33原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌E. coli BL21中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Tex33蛋白。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,免疫成年雄性新西兰大白兔,获得Tex33多克隆抗体。ELISA测定多克隆抗体效价,Western blot法及免疫荧光组织化学染色分析多克隆抗体效价及特异性。结果成功构建了p ET-30a-Tex33重组质粒,IPTG诱导下表达出Tex33重组蛋白。ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶1 000 000,Western blot法分析显示多克隆抗体能识别小鼠睾丸组织中的Tex33蛋白,免疫荧光组织化学染色显示Tex33在成年小鼠睾丸组织的精子细胞及精子均有表达,且定位于精子顶体及尾部。结论成功制备出高特异性的兔抗小鼠Tex33多克隆抗体并发现Tex33在小鼠睾丸中表达。; 夏蒙蒙夏静杨迪刘梦如牛长敏申雪沂孙红亚郑英; 关键词：小鼠多克隆抗体精子发生

Stra8过表达精原细胞的细胞周期同步化方法的建立被引量：1: 2017年; 目的建立Stra8过表达精原细胞(Stra8-GC1)的细胞周期同步化方法,并应用流式细胞仪进行检测。方法 G1期同步化:应用血清剥夺方式分别培养Stra8-GC1 24h、36h、48h、60h、72h、84h和96h,收集细胞并应用流式细胞仪检测G1期细胞百分比;S期同步化:应用含有胸苷培养液培养Stra8-GC1 14~16h,更换正常培养基培养9h,再次加入胸苷培养14~16h,最后更换正常培养基分别培养0、3h,6h和9h,收集细胞并应用流式细胞仪检测S期细胞百分比;M期同步化:应用含有诺考达唑培养液分别培养Stra8-GC1 4h,8h和12h,收集细胞并应用流式细胞仪检测M期细胞百分比。结果血清剥夺处理72h,Stra8-GC1 G1期细胞百分比为60%~70%,显著高于对照组的31.73%(P<0.05);二次胸苷阻滞法处理以及第二次释放3h,Stra8-GC1 S期细胞百分比为60%~70%,显著高于对照组的38.50%(P<0.05);诺考达唑处理8h,Stra8-GC1 M期细胞百分比为90%以上,显著高于对照组的13.85%(P<0.05)。结论成功构建Stra8过表达细胞的细胞周期同步化方法,为后续Stra8的功能研究奠定了基础。; 申雪沂郭佳倩牛长敏马海涛夏静夏蒙蒙王建军郑英; 关键词：细胞周期同步化精原细胞

慢病毒介导的miR194-5p过表达精原细胞株的建立被引量：1: 2018年; 目的构建miR194-5p慢病毒表达载体pMSCV-PIG-miR194-5p,应用包装后产生的慢病毒感染Stra8-GC1-spg细胞,获得稳定过表达miR194-5p精原细胞株。方法用PCR法扩增miR194-5p的前体序列pri-miR194-5p。利用分子克隆技术构建慢病毒表达载体pMSCV-PIG-miR194-5p。将其与Gag pol和VSV.G辅助质粒一起用PEI法共转染至293T包装细胞内,收集慢病毒上清,后将其感染Stra8-GC1-spg细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达miR194-5p的精原细胞株。结果构建了慢病毒重组质粒pMSCV-PIG-miR194-5p。经酶切鉴定及DNA测序法证实序列准确无误。经包装产生的慢病毒能成功感染Stra8-GC1-spg细胞,并稳定过表达miR194-5p。结论成功地构建了慢病毒表达重组质粒pMSCV-PIG-miR194-5p,经包装后产生预计的慢病毒,建立了稳定过表达miR194-5p的精原细胞株。; 夏静夏蒙蒙牛长敏申雪沂王建军郑英; 关键词：微RNAS 精原细胞细胞系

MicroRNA参与调控睾丸支持细胞的增殖与粘附功能被引量：4: 2018年; 精子发生过程需要生精细胞及睾丸体细胞的共同参与,这两种细胞也决定着睾丸的发育及雄性生育力。支持细胞是生精小管中唯一的体细胞,在正常精子发生过程中发挥重要的作用。支持细胞增殖与粘附功能的异常将导致精子发生异常,进而引发雄性不育。近年来研究发现,micro RNA(mi RNA)可调控支持细胞的增殖与粘附功能,其表达水平在激素、内分泌干扰素和营养状况等多种因素作用下发生特异性变化。本文总结了与睾丸支持细胞增殖与粘附功能相关的mi RNA及其作用机制,以期发现并鉴定更多与支持细胞相关的mi RNA,进而为探索与支持细胞相关不育症的病因提供理论依据。; 夏蒙蒙申雪沂牛长敏夏静孙红亚郑英; 关键词：MIRNA 支持细胞增殖粘附

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夏静