杨畅
- 作品数：63 被引量：63H指数：4
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技计划项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 稳定表达CYP2A13和CYP2A13/POR的Flp-In CHO重组细胞系的构建
- 2022年
- 目的分别构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(cytochrome P450 family 2 subfamily A member 13,CYP2A13)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-CHO)和稳定表达CYP2A13和细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-POR-CHO),并从中筛选代谢活性较好的细胞系。方法课题组前期通过慢病毒转染构建了稳定表达POR的Flp-In CHO细胞系(POR-Flp-In CHO)。该文构建了pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒,利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒分别转染到Flp-In CHO细胞和POR-Flp-In CHO细胞中。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和黄曲霉素B1(AFB1)/4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒实验来检测CYP2A13的表达及其活性,并比较了CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO两种重组细胞系的代谢活性。结果与未转染的细胞相比,CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO的CYP2A13 mRNA和蛋白的表达量均明显增加。且与CYP2A13-POR-CHO相比,CYP2A13-CHO细胞对AFB1、NNK的敏感度更高。结论建立了稳定表达CYP2A13且代谢活性较好的CYP2A13-CHO细胞系,为后续筛选能被CYP2A13代谢活化的前致癌物提供了工具。
- 孙莉陆定艳刘欢何俊奇孙佳孙佳王永林李勇军杨畅
- 黑骨藤药材中体内直接作用成分的检测方法
- 本发明公开了黑骨藤药材中体内直接作用成分的检测方法，采用超高效液相色谱‑四级杆飞行时间串联质谱联用(UHPLC‑Q‑TOF‑MS)技术，通过比较黑骨藤提取物、大鼠口服黑骨藤提取物后血清指纹图谱及空白大鼠血清指纹图谱，确定...
- 郑林黄勇李勇军巩仔鹏李月婷覃小丽杨畅孙佳陆苑刘亭
- 文献传递
- 检测铁皮石斛中多菌灵及甲基硫菌灵残留方法
- 本发明公开了一种检测铁皮石斛中多菌灵及甲基硫菌灵残留方法,通过对照品溶液制备、供试品溶液的制备和液相色谱检测，其中液相色谱检测中设定特定的参数。整个过程中能够大大降低有机试剂的消耗，且操作方便，检测稳定性好。针对于多菌灵...
- 陈思颖谭丹王永林李勇军兰燕宇王爱民杨畅孙佳杨传玉吴耽陆苑李月婷巩仔鹏刘春花
- 文献传递
- 杏叶防风的化学成分及抗炎活性研究(Ⅱ)
- 2024年
- 为了研究杏叶防风(Pimpinella candolleana)的化学成分及其抗炎活性,采用正相硅胶、ODS反相硅胶、D101大孔吸附树脂及MCI树脂等多种色谱方法对杏叶防风70%乙醇提取物部位进行了分离,并通过与文献对比波谱数据鉴定化合物结构。体外培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW 264.7)细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞建立氧化损伤模型,利用一氧化氮(NO)试剂盒检测NO浓度,评价各化合物的抗炎活性。从该植物中分离得到25个黄酮类化合物,分别鉴定为1-hydroxy-2,3,4,7-tetramethoxyxanthone(1)、1-hydroxy-2,3,4,6-tetramethoxyxanthone(2)、bellidifolin(3)、desmethylbellidifolin(4)、当药醇苷(5)、日本当药黄素(6)、异日本獐牙菜素(7)、木犀草素-7-O-β-D-芸香糖苷(8)、luteolin-7-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-[6′′′-O-caffeoyl]-β-D-glucopyranoside(9)、木犀草素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(10)、木犀草素-6-C-β-L-岩藻糖苷(11)、荭草素(12)、异荭草素(13)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(14)、芹菜素(15)、quercetin-3-O-β-D-(6″-caffeoylgalactoside)(16)、小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(17)、葛根素(18)、牡荆素(19)、商陆素-3-O-β-D-葡萄糖苷(20)、商陆素-3-O-β-D-半乳糖苷(21)、鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷(22)、鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(23)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(24)、柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷(25)。其中,化合物13~15首次从杏叶防风中分离得到,化合物1~12、16~25首次从茴芹属植物中分离得到;生物活性测定结果表明,化合物1~3、6~10、12~15、17~20、23、25能抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞的NO释放,显示出一定的抗炎活性。
- 汪洋薛靖怡雷艳潘洁杨畅李勇军马雪
- 关键词：化学成分抗炎
- 一种王瓜子药材的质量标准检测方法
- 本发明公开了一种王瓜子药材的质量标准检测方法，包括性状、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、浸出物测定。本发明在现有《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)的基础上修订了性状、并增加了薄层鉴别、水分、总灰分、浸出物项下...
- 马雪朱敏汇李勇军刘春花王爱民李月婷巩仔鹏杨畅
- 文献传递
- 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化被引量：1
- 2021年
- 目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。
- 张煜彬吴忠秀何彬杨畅李勇军刘亭
- 关键词：间接ELISA单链抗体
- 便携式经颅磁刺激仪在药物传递系统中的应用
- 本发明属于医疗设备应用领域，具体涉及便携式经颅磁刺激仪在药物传递系统中的应用；通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，考察模型大鼠脑组织中灯盏乙素的含量，我们发现，便携式经颅磁刺激仪对药物的靶向传递有着一定的积极作用，为经颅磁...
- 杨畅王立斌刘亭李勇军巩仔鹏郑林黄勇王广成
- 文献传递
- CYP2A13/MRP2双表达Flp-In^TM CHO细胞系的建立被引量：4
- 2019年
- 目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(CYP2A13)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的双转染Flp-In^TM CHO细胞系.方法分别构建pCMV6-NEO-CYP2A13和pcDNA5-MRP2重组质粒.先将pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至Flp-In^TM CHO细胞中,通过有限稀释法和4-甲基亚硝胺-1-3-呲啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞.再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞中.用实时定量P眈CR、Western blot法和NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中CYP2AI3和MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13和MRP2的FlpInTMCHO细胞.结果相较于未转染细胞,CYP2AI3-Flp-In^TMCHO细胞的CYP2A13表达增加,NNK毒性敏感度增加;CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13和MRP2表达也明显增加.和CYP2AI3-Flp-In^TM CHO细胞相比,CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13表达量无明显差异,MRP2表达增加,NNK毒性敏感度明显降低.结论成功建立了CYP2A13和MR凹的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础.
- 刘香香何俊奇杨畅王永林薛维娜何彬李勇军兰燕宇刘亭
- 参芎葡萄糖注射液对CoCl_(2)诱导的H9c2细胞凋亡的影响被引量：3
- 2021年
- 目的探讨参芎葡萄糖注射液对氯化钴(CoCl_(2))诱导的H9c2心肌细胞凋亡的拮抗作用及其机制。方法体外培养H9c2细胞,利用CoCl_(2)建立细胞凋亡模型;MTS法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测c-Jun、p-c-Jun、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase 3的表达情况。结果CoCl_(2)浓度在600μmol/L处理24 h的情况下可建立H9c2细胞凋亡模型;不同浓度的SGI预处理后,可明显增加细胞存活率,降低细胞凋亡率,下调蛋白c-Jun磷酸化水平、Bax和Cleaved caspase 3表达水平,上调蛋白Bcl-2表达水平。结论SGI预处理对CoCl_(2)诱导H9c2细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与其抑制c-Jun通路有关。
- 刘欢吴忠秀陆定艳席晓岚席晓岚李勇军王永林李勇军
- 关键词：参芎葡萄糖注射液H9C2细胞细胞凋亡
- 荭草花抗心肌缺血活性成分的筛选方法
- 本发明公开了一种荭草花抗心肌缺血活性成分的筛选方法，应用心肌细胞选择性地结合荭草花提取物中的活性成分，洗去未结合的其他成分后，使细胞靶点失活，被结合的活性成分从心肌细胞中释放出来，然后采用UHPLC‑Q‑TOF/MS技术...
- 郑林李勇军黄勇王永林廖尚高谢玉敏李月婷巩仔鹏孙佳杨畅陆苑刘亭陈思颖
