张江
- 作品数：22 被引量：73H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立
- 2019年
- 目的制备牛对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法。方法将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体。以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1600、1∶3200、1∶6400、1∶12800)及单克隆抗体浓度(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2 h、4℃孵育过夜)、封闭液(1%脱脂奶粉、5%脱脂奶粉、0.5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2 h、37℃4 h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度。采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量。结果建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3.2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5%脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜。牛PON-1蛋白标准品浓度在90~3125 ng/mL浓度范围内,与A450值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0.6186 x-0.7536,R2=0.9813;5份样品检测结果均值为764.21 ng/mL,回收率为97.97%。市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显著低于对照组(P<0.001)。结论成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度。
- 赵畅张江范子玲白云龙孙书函宋玉曦夏成
- 关键词：多克隆抗体
- 泌乳期奶牛尿液酸碱度与疾病的相关性分析被引量：4
- 2017年
- 为了研究尿液pH与奶牛生产性能和健康的关系,帮助牛场及早监控奶牛酸碱平衡紊乱状况,选择57头泌乳奶牛采集尿液(601份),并根据尿液pH分为酸性组(24头)、中性(正常)组(22头)和偏碱组(11头),将酸性组细分为极酸组(15头)和偏酸组(9头),调查尿液pH对奶牛泌乳量、发病率和淘汰率的影响,以及评估小苏打应用效果。结果显示:尿液偏酸的奶牛疾病发生率为83.33%,尿液偏碱的奶牛疾病发生率的为72.72%,尿液中性的奶牛疾病发病率为18.18%;尿液pH偏酸与瘤胃酸中毒、真胃变位、前胃弛缓/臌气、酮病、趾间皮炎/蹄叶炎呈负相关,且关联性强;而尿液pH偏碱的与乳房炎呈正相关,且关联性强;极酸组的淘汰率为26%,偏碱组为18%,偏酸组为0,中性组为5%;该牛场泌乳奶牛饲喂小苏打0.26 kg/头比0.19kg/头能更有效地控制尿液pH异常,减少相关疾病的发生,降低淘汰率,提高经济效益。
- 赵畅白云龙舒适范子玲张江夏成
- 关键词：泌乳奶牛尿液PH疾病泌乳量
- 基于~1H-NMR技术的产后卵巢静止奶牛乳清和血清代谢谱分析被引量：5
- 2018年
- 旨在应用代谢组学技术筛选产后卵巢静止奶牛乳清和血清的差异代谢物,明确其与奶牛卵巢静止的关系。本研究选取产后45～60 d的正常发情奶牛和卵巢静止奶牛各14头进行试验。应用一维氢谱核磁共振(~1H-NMR)技术对两组奶牛的乳清和血清进行检测,结合多元统计分析和单变量分析,筛选出组间差异代谢物,并进行生物信息学分析,阐明差异代谢物参与的代谢通路与奶牛卵巢静止的关系。结果表明,在乳清和血清中分别筛选出13种差异代谢物。与发情奶牛相比,卵巢静止奶牛乳清中6种差异代谢物含量升高:琥珀酸、磷酸肌酸、甘氨酸、肌醇、乙醇酸、乳清酸,7种下降:丙氨酸、肌酐、磷酸胆碱、乳糖、牛磺酸、半乳糖、葡萄糖-1-磷酸;血清中4种差异代谢物升高:β-羟丁酸、乙酸、谷氨酰胺、甘氨酸,9种降低:丙氨酸、琥珀酸、柠檬酸、肌酐、磷酸胆碱、葡萄糖、肌醇、酪氨酸、组氨酸。两组奶牛乳清差异代谢物主要参与牛磺酸和亚牛磺酸代谢、半乳糖代谢、原代胆汁酸生物合成等。血清差异代谢物主要参与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、柠檬酸循环、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成等。本研究获得了卵巢静止奶牛乳清和血清的代谢谱及其差异代谢物,结果表明了主要的糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢的异常途径在奶牛产后卵巢静止发生中所起的作用,为今后深入研究奶牛产后卵巢静止发生机制和防治策略提供了新的方向。
- 范子玲宋玉锡张江赵畅白云龙孙书函夏成
- 关键词：卵巢静止乳清
- 血浆对氧磷酶1在奶牛酮病中的变化及其预测作用被引量：2
- 2016年
- 为了早期预测奶牛酮病的发生,随机选取黑龙江某集约化牛场,产后14～21 d奶牛为试验动物。通过对氧磷酶1（PON1）、葡萄糖（GLU）、游离脂肪酸（NEFA）、β-羟丁酸（BHBA）和谷草转氨酶（AST）的检测,阐明奶牛围产期PON1在奶牛酮病发生风险的预警作用。结果表明,酮病组较对照组奶牛血浆中PON1活性和含量显著下降。PON1含量、活性与GLU、BHBA、NEFA和AST均有显著相关性。根据受试者工作特征曲线（ROC）分析确定酮病预测值为血浆PON1含量〉46.79 nmol/L、GLU〉3.04 mmol/L、AST〈100 U/L、NEFA〉0.82 mmol/L。试验表明,PON1、GLU、AST和NEFA均可用作预测奶牛酮病发生风险的评估指标。
- 曹宇张江杨威夏成张洪友王艳辉徐闯
- 关键词：奶牛酮病对氧磷酶-1ROC分析
- 日粮对黑龙江省某牛场育成肉牛营养代谢状况的影响被引量：3
- 2019年
- 为了探究不同日粮组成对育成肉牛营养代谢水平的影响,研究选择黑龙江省两肉牛场(A牛场N=32,B牛场N=22)300~330日龄育成牛共54头进行试验。应用全自动生化分析仪,对试验牛血浆生化指标进行分析,检测Glu、BHBA、TBIL、TC、BUN、Ca、Mg、SOD、GSH、NEFA、AST、ALT、TP、ALB、TG、GLO、GGT、L-ACT、BUN含量,从矿物质代谢、能量代谢、氧化应激、肝功能及其它功能相关的代谢指标,评定育成牛营养代谢状况。结果显示:牛场A,血浆中BHBA、TBIL、TC显著高于牛场B,其中TC与TBIL是极显著的差异,而血浆中Ga、BUN、Glu、GSH、SOD显著低于牛场B,其中Glu、GSH、SOD呈极显著性。牛场B育成牛在能量代谢及氧化应激方面优于牛场A,牛场A需要增加育成牛日粮能量配比和抗氧化水平,并应适当提高育成牛的日粮中钙和蛋白质的含量。
- 孙书函牛聪张江夏成张洪友
- 关键词：育成牛日粮营养代谢
- 基于液质联用技术的卵巢静止奶牛血浆代谢轮廓分析被引量：4
- 2020年
- 旨在应用代谢组学技术筛选产后卵巢静止奶牛血浆中差异代谢物,探究差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。试验选取了产后45~60 d卵巢静止奶牛和正常发情奶牛各15头,应用LC/MS技术检测两组奶牛血浆样品,运用多元统计分析与单变量分析,结合生物信息学分析,筛选出血浆差异代谢物,揭示不同代谢通路中的差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。结果显示:LC/MS分析共筛选出14种血浆差异代谢物。与发情组奶牛相比,卵巢静止组奶牛有11种差异代谢物明显升高:分别是D-塔格糖、L-亮氨酰-L-脯氨酸、L-鹅肌肽、脯氨酸-缬氨酸、赖氨酸-亮氨酸、N-(3-苯基丙酰基)甘氨酸、7-烯胆(甾)烷醇、γ-生育酚、β-隐黄素、视黄醛和鞘磷脂;3种差异代谢物降低:分别是胞嘧啶、1-棕榈酰溶血磷脂酰胆碱和1-硬脂酰-SN-甘油-3-磷酰胆碱。代谢通路分析代谢组学所获得的奶牛卵巢静止血浆差异代谢物,提示奶牛产后糖代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和谷胱甘肽代谢等的异常会阻碍卵泡发育,从而导致奶牛产后发生卵巢静止。本试验获得了卵巢静止奶牛血浆差异代谢物,探究了奶牛产后卵巢静止发生中差异代谢物在糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢以及其他代谢的变化,为今后深入研究奶牛卵巢静止的发病机理及防治新策略提供了方向。
- 张锋张江白云龙夏成张洪友徐闯
- 关键词：奶牛卵巢静止
- 基于GC/MS技术的产后卵巢静止奶牛血浆代谢谱分析被引量：6
- 2017年
- 【目的】运用代谢组学中气相色谱/质谱联用技术(GC/MS)筛选卵巢静止奶牛和正常发情奶牛的血浆差异代谢物,探究奶牛发生卵巢静止时其体内代谢的变化。【方法】在黑龙江省某集约化牛场选取产后60—90 d,年龄、胎次、体况相近的经产高产奶牛为实验动物。根据奶牛的发情表现、直肠检查、B超检查及激素检测的结果,将奶牛分为发情组(A)22头和卵巢静止组(B)20头。应用GC/MS对两组奶牛的血浆样品进行检测得到其代谢组图谱,利用Chroma TOF软件对得到的峰图进行分析,得到原始数据。将标准化的GC/MS数据矩阵导入SIMCA-P+14.0软件包中,进行多元统计分析,先进行无监督的主成分分析PCA来观察各样本之间的总体分布和整个分析过程的稳定性,然后用有监督的(正交)偏最小二乘法分析(O)PLS-DA来区分各组间代谢轮廓的总体差异,找到组间的差异代谢物。为防止模型过拟合,采用七次循环交互验证和200次响应排序检验的方法来考察模型的质量。采用多维分析(O)PLS-DA和单维分析(t-test)相结合的办法,来筛选组间差异代谢物。在(O)PLS-DA分析中,变量权重值VIP>1的变量为差异变量;在t-test中,P<0.05的变量为差异变量。筛选VIP>1且P<0.05的代谢物作为差异代谢物,最后采用KEGG途径数据库对两组奶牛血浆样本进行代谢组学差异代谢物通路富集及互作网络构建分析。【结果】与正常发情奶牛相比,卵巢静止奶牛血浆中共有20种代谢产物表现异常,其中17种差异表达代谢物与奶牛卵巢静止的发生密切相关,包括水平增加的胆酸,水平下降的香草扁桃酸、烟酸甘氨酸、6-羟基烟酸、β-丙氨酸、L-酪氨酸、苯丙酮酸等,这些代谢产物参与了苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的生物合成,并参与了丙酸乙酯、烟酸烟碱、苯丙氨酸和酪氨酸的代谢,它们通过单一途径或综合途径对奶牛卵泡的正常生长产生干扰,�
- 范子玲许楚楚舒适肖鑫焕王刚白云龙张江赵畅夏成
- 关键词：奶牛卵巢静止
- 黑龙江省某集约化牛场酮病奶牛血液生化指标变化被引量：11
- 2018年
- 通过酮病奶牛与健康奶牛的血液生化指标分析,阐明酮病奶牛血液病理学变化,为酮病预防提供科学依据。随机选取黑龙江省某集约化牛场围产后期10头奶牛,根据血酮仪检测β-羟丁酸（BHBA）的浓度进行分组,检测2组的血液生化指标并进行相关性分析。结果：酮病奶牛血中BHBA和总胆红素（TBIL）含量升高,而游离脂肪酸（NEFA）和葡萄糖（Glu）含量降低,且差异极显著（P〈0.01）,其中BHBA、NEFA都超出正常范围;碱性磷酸酶（ALP）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量显著降低,血肌酐（CREA）和L乳酸盐（L-ACT）显著升高（P〈0.05）,而门氨酸氨基转移酶（AST）含量升高且超出正常范围;酮病组奶牛血钙（Ca）浓度降低且低于正常范围;且酮病组奶牛血浆中牛结合珠蛋白（HP）极显著高于健康组,血浆中白介素1β（IL-1β）酮病组高于健康组,但差异不显著。本研究表明酮病奶牛血液中能量代谢、肝功、矿物元素和炎性因子等指标发生了明显变化,结果为诊断与预防酮病提供了病理学基础。
- 张江孙书函赵畅范子玲白云龙舒适夏成
- 关键词：奶牛酮病Β-羟丁酸肝功
- 围生期奶牛低钙血症与TRAP-5b的关系研究进展被引量：1
- 2018年
- 奶牛低钙血症是奶牛围生期矿物质代谢紊乱性疾病。奶牛骨骼中含有的钙约占机体钙含量的99%。低钙血症可引起一系列代谢障碍性疾病,这些疾病发病率高,会给养殖者造成巨大的经济损失。随着对奶牛低钙血症研究的不断深入,研究者们发现产前骨钙动员、破骨细胞的活性增强与产后低钙血症有显著的相关性。作为破骨细胞和骨吸收的标志物,抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRAP-5b）等骨代谢生化标志物在围生期奶牛血浆中有明显的变化。因此,笔者查阅了大量文献,概述了奶牛低钙血症与骨代谢生化标志物TRAP-5b的关系及其研究进展。
- 赵畅舒适白云龙肖鑫焕王刚范子玲张江夏成
- 关键词：奶牛低钙血症骨吸收破骨细胞
- 卵巢静止奶牛血液矿物质及生化指标变化研究被引量：2
- 2020年
- 为了给牧场防控奶牛卵巢静止疾病提供科学依据,试验选取产后45~60天卵巢静止的和正常发情的中国荷斯坦奶牛各15头,采用抽血检测的方法分析了卵巢静止奶牛血液中矿物质及生化指标的变化情况。结果表明:与正常发情组奶牛相比,卵巢静止组奶牛日泌乳量显著提高(P<0.05),发情次数显著减少(P<0.05),卵泡直径极显著减小(P<0.01);丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性显著提高(P<0.05),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性极显著提高(P<0.01);血中矿物质镁(Mg)含量显著降低(P<0.05);另外,卵巢静止组奶牛血中雌二醇(E2)浓度极显著降低(P<0.01)。说明产后卵巢静止奶牛血液能量、肝功指标、矿物元素及生殖激素等发生了明显变化。
- 张锋张江白云龙夏成徐闯张洪友
- 关键词：奶牛卵巢静止能量代谢矿物质元素肝功指标生殖激素
