王敏
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南京医科大学附属淮安第一医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅科研基金江苏省社会发展科技计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 长链非编码RNA ENSMUST00000127391重组慢病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的构建表达长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)ENSMUST00000127391(LINC127391)的重组慢病毒载体,并感染小鼠肾小球系膜细胞(mice mesangial cells,MMCs)使LINC127391在高糖的MMCs中表达。方法以MMCs的cDNA为模板利用PCR法扩增LINC127391全长,将其插入pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,构建重组慢病毒载体pCDH-LINC127391。将重组目的质粒pCDH-LINC127391与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染到293T细胞,收获表达LINC127391的重组慢病毒上清液,检测病毒滴度。病毒液感染MMCs,通过实时定量PCR法检测LINC127391的表达情况。结果质粒酶切以及测序鉴定结果证明重组质粒pCDH-LINC127391构建成功,并测得病毒液滴度约为2×10~7efu/mL。病毒液感染MMCs后实时定量PCR检测发现LINC127391表达明显增加。结论成功构建了重组质粒pCDH-LINC127391。
- 王敏陆卫平姚迪王苏雨卢春
- 关键词：长链非编码RNA肾小球系膜细胞转染慢病毒
- 转染lncRNA Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞中FN、Col Ⅰ表达变化
- 2016年
- 目的观察转染长链非编码RNA（lncRNA）Gm15638的小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES13中纤维化标志物纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）的表达变化。方法采用PCR法扩增lncRNA Gm15638片段,并将其插入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建重组慢病毒载体p CDH-Gm15638。用转染试剂将重组目的质粒p CDH-Gm15638与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共同转染293T细胞,收集重组慢病毒悬液,测定病毒滴度。将SV40-MES13细胞分为实验组和对照组,分别转染p CDH-Gm15638和慢病毒空载体p CDH-Mock。转染48 h后采用real-time PCR法检测Gm15638验证p CDH-Gm15638转染情况;提取细胞总蛋白,采用Western blotting法检测FN、ColⅠ。结果双酶切鉴定和测序结果显示,重组慢病毒载体p CDH-Gm15638构建成功。通过三质粒包装获得重组慢病毒,测得病毒滴度约6×10^7efu/m L。实验组、对照组细胞中Gm15638相对表达量分别为867、1,两组相比,P〈0.05。实验组细胞中FN、ColⅠ相对表达量分别为0.739、1.08,对照组分别为0.48、0.845,两组相比,P均〈0.05。结论转染Gm15638的SV40-MES13细胞中纤维化标志物FN、ColⅠ表达水平下调。
- 王苏雨王敏姚迪卢春陆卫平
- 关键词：长链非编码RNA肾小球系膜细胞纤维连接蛋白
- EGF诱导ROS调控HIF-1a和VEGF的表达影响卵巢癌新的血管生成
- 目的:探讨EGF诱导对卵巢癌细胞OVCAR-3中ROS表达水平的影响,及其在卵巢癌新的血管生成中的分子机制。方法:用20ng/ml EGF作用卵巢癌细胞OVCAR-3,处理不同时间(15min、30min、1h、2h)后...
- 傅广波黎琪王敏牛晓兵王心如江秉华
- 文献传递
- 达格列净通过Rffl抑制STAT1/TGF-β1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化被引量：3
- 2023年
- 目的:探讨达格列净对糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞-间充质转化和纤维化的影响及分子机制。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,分为对照组、高糖组、低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组。用Western blot与RT-PCR分别检测E3泛素连接酶Rffl的表达水平。Western blot检测各组上皮细胞钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(Fibronectin)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)的表达水平。在HK-2细胞中过表达Rffl后,Western blot检测E-cadherin、α-SMA、Fibronectin、TGF-β1、STAT1的表达水平。结果:高糖组中Rffl的表达水平显著低于对照组,加入达格列净后Rffl表达升高;与对照组相比,高糖组细胞中E-cadherin表达水平降低,Fibronectin、α-SMA表达水平升高,过表达Rffl后E-cadherin表达水平升高,Fibronectin、α-SMA表达水平降低;与高糖组相比,低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组中E-cadherin表达水平均升高,Fibronectin、α-SMA表达水平均降低,且呈一定的剂量依赖性;与对照组相比,高糖组细胞中STAT1、TGF-β1的表达水平升高,而在过表达Rffl或达格列净作用后则明显降低。结论:达格列净通过上调Rffl的表达抑制STAT1/TGF-β1信号通路,改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞-间充质转化和纤维化。
- 徐洋王敏张恒璐周莉陆卫平
- 关键词：糖尿病肾病TGF-Β1EMT纤维化
- 长链非编码RNA ENSMUST00000127391对小鼠肾小球系膜细胞增殖和纤维化的影响
- 2021年
- 目的:探究长链非编码RNA ENSMUST00000127391(lncRNA 127391)在高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(mice mesangial cell,MMC)中的表达及功能。方法:在成功构建重组质粒pCDH-lncRNA 127391的基础上,将重组质粒pCDH-lncRNA127391和对照质粒p CDH分别转染MMC细胞,通过RT-qPCR法检测lncRNA 127391表达水平。蛋白质免疫印迹法检测增殖和纤维化相关蛋白水平;CCK8法检测lncRNA 127391对MMC细胞增殖的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡的影响。结果:过表达lncRNA 127391的MMC细胞构建成功。CCK8结果显示,lncRNA 127391表达增加后,MMC细胞增殖速度减慢;蛋白质免疫印迹结果表明过表达lncRNA 127391后,MMC细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(Col-1)蛋白表达水平均下降;流式分析结果显示,过表达lncRNA127391后,MMC细胞凋亡数增加。两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:lncRNA 127391可以抑制高糖培养的MMC细胞增殖和纤维化。
- 李兰兰陈欣张恒璐王敏陆卫平
- 关键词：长链非编码RNA糖尿病肾病增殖纤维化
- Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)联合LCR与脓毒症休克患者预后的相关性研究被引量：3
- 2021年
- 目的探讨中心静脉-动脉二氧化碳分压差(Pcv-aCO_(2))/动脉-中心静脉氧含量差(Ca-cvO_(2))联合乳酸清除率(lactate clearance rate, LCR)对脓毒症休克患者预后的评估作用。方法选取2017年1月~2019年3月在我院治疗的脓毒症休克患者110例,均给予常规复苏治疗,比较28 d病死者与存活者复苏6 h Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)、LCR、急性生理与慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分和序贯器官衰竭(SOFA)评分等。结果 110例患者中,28 d病死者39例,28 d病死率为35.45%;病死组复苏6 h Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)、APACHEⅡ评分和SOFA评分分别为(2.15±0.41)、(20.15±3.22)和(10.10±2.09)分,明显高于存活组(P<0.05),而LCR为(21.03±9.44)%,明显低于存活组(P<0.05);Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)与APACHEⅡ评分和SOFA评分呈正相关(r=0.304,0.311,P<0.05),LCR与APACHEⅡ评分和SOFA评分呈负相关(r=-0.324,-0.336,P<0.05);Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)、LCR及联合诊断患者28 d病死的ROC曲线下面积分别为0.680、0.815和0.873(P<0.05)。结论 Pcv-aCO_(2)/Ca-cvO_(2)及LCR在判断脓毒症休克患者预后方面有一定应用价值,值得进一步研究。
- 张鹏王敏
- 关键词：乳酸清除率脓毒症休克
- 呼吸阶梯化管理在救治急性肺损伤中的安全性以及有效性分析被引量：1
- 2018年
- 目的:研究呼吸阶梯化管理在急性肺损(ALI)伤救治中的应用价值。方法:共纳入2014年06月至2017年06月入我院诊断急性肺损伤患者共90例,随机分为对照组和观察组各45例,对照组采用常规急诊呼吸道管理,观察组采用呼吸阶梯化管理,对比两组动脉血氧分压(Pa O2)、二氧化碳分压(Pa CO2)和氧合指数(动脉血氧分压/吸入气中的氧浓度分数,Pa O2/Fi O2),创伤性气道技术(气管切开)和有创呼吸机应用率、气道并发症发生率和救治成功率,气道开放时间和住院时间。结果:观察组Pa O2和Pa O2/Fi O2高于对照组,Pa CO2低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组气管切开和有创呼吸机应用率下降,气道并发症发生率降低,总有效率提高(P<0.05)。观察组气道开放时间和住院时间缩短(P<0.05)。结论:呼吸阶梯化管理在急性肺损伤救治中有较好的安全性和有效性。
- 王敏尚福泰臧奎郭世光吉挺
- 关键词：急性肺损伤安全性有效性
- 达格列净对高糖诱导的肾小管上皮细胞环氧化酶、单核细胞趋化分子1、纤维连接素表达的影响
- 姚迪王苏雨王敏周莉陆卫平
