温睿
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：东华大学生物科学与技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委科技攻关项目上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 大腹园蛛主壶腹腺蛛丝蛋白末端结构域的克隆表达
- 2019年
- 牵引丝(dragline silk)由主壶腹腺蛛丝蛋白(major ampullate spidroin,MaSp)组成,是蜘蛛丝中强度最好的丝,同时具有极佳的生物相容性和可降解性,因此引起研究者的研究热潮。目前关于大腹园蛛MaSp结构和成丝机理方面的研究甚少,限制了其仿生应用。本文以大腹园蛛牵引丝的组成蛋白质之一MaSp1为研究对象,通过锚定PCR的方法首次获取了大腹园蛛MaSp1 NT的完整编码基因,并对其进行了克隆、表达、纯化,产量可达60 mg/L;同时对该MaSp1的CT进行表达纯化,产量可达80 mg/L。另外,通过CD色谱分析了MaSp1 NT和CT的二级结构,结果表明二者的二级结构均以α-螺旋为主。上述结果为大腹园蛛MaSp1的结构和成丝机理研究奠定了基础。
- 贾秋品温睿李雪孟清
- 关键词：大腹园蛛
- 重组杂合蛛丝蛋白MiSpNT-PySpRp-MiSpCT的二级结构表征被引量：2
- 2016年
- 重组蛛丝纤维作为一种性能优异的生物材料,具有良好的生物相容性,在生物医学工程领域具有极大的潜在应用价值。已有研究表明,重组蛛丝蛋白可用作血管、神经导管及药物载体等,但其生物学功能仍有待研究。本研究以大腹园蛛基因组为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得大腹园蛛梨状腺丝(piriform spidroin:Py Sp)一个完整重复区(Rp)编码序列;此Rp模块与Mi Sp NT/CT模块重组,构建微小型杂合蛛丝蛋白Mi Sp NT-Py SpRp-Mi Sp CT,成功在大肠杆菌BL21中高效表达,借助8 mol/L尿素裂解缓冲液进行变性纯化,得到纯度较高的杂合蛛丝蛋白Mi Sp NTPy SpRp-Mi Sp CT,产量约100 mg/L。CD图谱显示,Mi Sp NT-Py SpRp-Mi Sp CT蛋白质溶液主要以α-螺旋和无规卷曲形式存在,随着溶液p H值降低,部分α-螺旋向β-折叠转变;红外光谱显示,在自然成丝及冻干过程中,部分α-螺旋转化为β-折叠,符合天然蛛丝蛋白成丝过程的二级结构变化特征。本研究结果为今后获得具有天然蛛丝纤维优异性能的人工重组蛛丝纤维材料提供一种新的可能。
- 吴忠笏温睿孟清
- 大腹园蛛黏液蛋白ASG2 C端功能模块的克隆表达及圆二色谱分析被引量：2
- 2018年
- 蜘蛛分泌的黏合物(ASG),可形成黏附性极佳的胶滴,可用于捕获猎物。其中ASG2组分被证明属于蛛丝蛋白家族,因其独特的材料学性能,ASG2具有作为新型生物材料的潜能。目前,有关ASG2末端功能区(CT)的研究非常少,阻碍了ASG2的仿生应用。为丰富ASG2 CT的基因材料,以大腹园蛛基因组DNA为模板,利用锚定PCR的方法,首次获取了大腹园蛛ASG2 CT的完整编码基因AvASG2CT,并对其进行了外源克隆表达及纯化,产量可达75 mg/L;同时利用圆二色谱对其二级结构进行分析,表明其主要构象为α-helix,这是首次对ASG2 CT的二级结构进行探索,为后续的ASG2 CT的结构和功能研究奠定基础。
- 张露温睿李雪孟清林瑛
- 关键词：克隆表达
