熊晶
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CTP-NPRL2融合蛋白对肾癌原代细胞迁移侵袭能力的抑制及机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法胶原酶消化法培养肾癌原代细胞;构建原核表达质粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2,表达融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2,并通过Western blot鉴定目的蛋白的表达。将培养成功的原代细胞分为BLANK组、NPRL2组和CTP-NPRL2组。免疫荧光检测目的蛋白的细胞定位;Transwell迁移侵袭实验检测导入NPRL2蛋白后,对肾癌细胞迁移侵袭能力的影响;Real-time PCR检测Raptor、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤粘蛋白(Fibronectin)m RNA表达水平;Western blot检测Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平。结果成功培养出肾癌原代细胞并通过鉴定;测序结果及Western blot检测结果显示质粒构建成功并表达出目的蛋白;免疫荧光检测结果显示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿过胞膜并定位于胞浆;迁移和侵袭实验显示CTP-NPRL2组肾癌细胞迁移侵袭能力明显下降(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果显示CTP-NPRL2组Raptor、Vimentin与Fibronectin的m RNA、蛋白表达水平与NPRL2组和BLANK组相比明显降低(P<0.05),而E-cadherin的mRNA、蛋白表达水平与NPRL2组与BLANK组相比明显升高(P<0.05)。结论 NPRL2可能通过与Raptor相互作用影响mTORC1的活性,进而调节EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达量,影响肾癌细胞的迁移侵袭能力。
- 史晓博叶茂曾洋陈明龙陈志雄熊晶吕不凡唐伟
- 关键词：迁移上皮间质转化
- RNA干扰LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2016年
- 目的:探讨LKB1/STKll(Liver kinase B1/Serine-Threonine Kinase II)基因沉默对前列腺癌细胞株PC-3中增殖相关因子细胞周期素D1(cyclin D1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(Mcm2)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响及其可能机制。方法:将重组表达质粒LKB1-shRNA1(LKB1-shRNA1组)和阴性对照质粒sh NC(阴性对照组)采用脂质体介导法转染至前列腺癌细胞株PC-3中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,RT-PCR法检测转染前后细胞中LKB1,cyclin D1,Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平;Western blot法检测转染前后细胞中LKB1,cyclin D1,Mcm2和PCNA蛋白表达水平;CCK-8法检测转染后细胞的增殖能力。结果:与未转染组和阴性对照组相比,LKB1-shRNA1组细胞中LKB1,cyclin D1,Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,LKB1-shRNA1组PC-3细胞的生长速度明显增加。结论:LKB1基因沉默上调前列腺癌细胞中cyclin D1,Mcm2和PCNA的表达,LKB1可作为研究前列腺癌细胞增殖分子机制的新靶点。
- 刘超颖唐伟蒋立熊晶邓玮
- 关键词：前列腺癌LKB1基因细胞周期素D1增殖细胞核抗原
