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大鼠肝脏细胞同步分离与培养方法的建立: 2018年; 目的建立一种同时分离大鼠肝细胞(parenchyma cell,PC)、肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,SEC)与库普弗细胞(Kupffer cell,KC)的操作方案。方法采用EDTA/胶原酶两步灌注法获取肝细胞悬液,通过低速离心首先分离出PC组分,然后通过链蛋白酶E去除非实质细胞(nonparenchymal cell,NPC)中的PC,最后通Nycodenz和Percoll溶液进行梯度离心分离并纯化HSC、SEC和KC,体外培养并观察各细胞表型和功能的变化。结果 PC、HSC、SEC和KC平均每克组织产量分别为(26±9.2)×10~6、(1.5±0.2)×10~6、(7.4±1.5)×10~6和(3.1±0.9)×10~6,活力分别为(93.1±2.3)%、(90.1±3.4)%、(96.2±2.1)%和(98.2±1.7)%,纯度分别为(98.5±1.2)%、(95.1±2.5)%、(93.6±3.6)%和(98.1±1.4)%;HSC在体外培养过程中逐渐丧失维生素A,转化为肌成纤维样(myofibroblast,MF)细胞;SEC在体外培养第3天出现凋亡,至7天凋亡达到顶峰,随后少量存活的细胞在体外增殖,至培养14天时形成典型的"铺路石"形态;培养14天的SEC保留清道夫功能,但丧失窗孔结构;KC可在体外增殖,培养至14天仍具有吞噬功能,表达特征性标志CD68。结论本方法可同时分离大鼠肝脏细胞,细胞数量、纯度和活力可满足下游实验。; 潘艳王万鹏张启迪华香房凤梅傅承宏王维; 关键词：细胞分离肝星状细胞肝纤维化上皮-间充质转分化

缺铁对孕期大鼠生育能力的影响: 2016年; 目的:探讨孕期缺铁对大鼠生育能力的影响。方法:选取雌性Wistar大鼠32只,随机分为对照组和实验组,分别喂对照组饲料和低铁饲料,4周后以2颐1比例与雄性大鼠同笼交配。确认受精后分笼饲养,各组继续饲料喂养直至分娩,在雌鼠孕末期、内眦静脉采血(3mL左右),检测相关参数及分离血浆,检测相关激素,以及子代出生体重。结果:与对照组相比,实验组大鼠血浆EPO、IFG-1、GH、ACTH和GHRH、EPI水平有显著性差异(<0.05);两组大鼠血浆CORT水平无显著性差异(>0.05);实验组新生鼠出生体重明显低于对照组(<0.05)。结论:缺铁导致孕期大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)分泌紊乱和子代低出生体重,提示缺铁可能是宫内生长受限的因素之一,铁缺乏对孕期大鼠生育有影响。; 王维马雅静周祖钊呼延武; 关键词：缺铁促红细胞生成素下丘脑-垂体-肾上腺轴宫内生长受限

缺铁孕鼠子代肝脏EPO及EPOR的mRNA表达及意义: 2018年; 目的观察缺铁性贫血大鼠对其子代鼠肝脏中促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)的m RNA表达水平的影响,并探讨其变化意义。方法 36只4周龄的雌性Wistar大鼠随机分为2组进行饲养,实验组18只雌性Wistar大鼠给予低铁饲料喂养,构建缺铁性贫血大鼠模型。对照组18只雌性Wistar大鼠给予正常饲料喂养。实时荧光定量PCR检测两组大鼠各自子代新生仔鼠肝脏中EPO、EPOR的m RNA表达水平。结果 (1)低铁喂养后,实验组18只雌性Wistar大鼠血红蛋白、红细胞比容、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001),红细胞分布宽度高于对照组大鼠,提示缺铁性贫血大鼠模型造模成功;(2)实验组大鼠产仔数量较少,后代仔鼠出现缺铁性贫血症状,仔鼠体型较小,皮肤苍白;(3)实验组与对照组相比,实验组大鼠子代肝脏EPO m RNA表达水平上调,差异有统计学意义(P<0.01);(4)与对照组相比,实验组大鼠后代肝脏EPOR m RNA表达水平没有统计学差异(P>0.05)。结论铁缺乏大鼠子代出现一定程度的缺铁性贫血症状,缺铁性贫血大鼠对其后代仔鼠肝脏EPO m RNA表达水平有上调作用。; 邱智枫桑璐李佳斯王维刘稳马雅静; 关键词：促红细胞生成素促红细胞生成素受体

Notch信号转导通路在原代肝星状细胞体外培养活化中的作用被引量：4: 2018年; 目的探讨Notch信号转导通路在肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)体外培养活化中的作用。方法采用两步酶灌注法分离培养原代大鼠HSC并进行体外培养。激光共聚焦显微镜检测体外培养HSC第1天和第7天时形态、胞内维生素A、静止标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和活化标志α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的变化。采用RTPCR和Western blot检测HSC体外培养0天、3天和7天时上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关分子α-SMA、Ⅰ型胶原(collegenⅠ)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、蜗牛家族转录抑制因子1(snail family transcriptional repressor 1,Snail 1)等和Notch信号转导通路(受体Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4与靶基因Hes1、Hey1、Hey2、HeyL)的变化。使用Notch受体阻断剂DAPT干预后,检测体外培养的HSC中活化相关分子(α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1等)的改变。结果 (1)初分离的HSC经7天体外培养后逐渐向肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFs)样转化,表现为形态变长、维生素A水平和GFAP表达降低,α-SMA表达升高。(2)RT-PCR与Western blot结果表明,HSC体外培养存在自发EMT现象,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snai l表达上调及E-cadherin、CK7、CK19和Desmoplakin表达下调,同时Notch 2、Notch 3及Notch靶基因Hey2、HeyL表达逐渐增加。(3)使用DAPT后,可显著抑制原代HSC体外活化,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1的下调及E-cadherin、CK 7、CK 19和Desmoplakin转录或蛋白表达水平上调。结论 Notch信号转导通路的激活可能参与HSC的活化,可能是抗肝纤维化治疗的潜在靶点。; 潘艳张启迪房凤梅华香王维傅承宏秦娟王万鹏; 关键词：细胞分离肝纤维化上皮-间充质转分化肝星状细胞

孕鼠铁缺乏对子代GH-IGF-1轴的影响: 2017年; 目的探讨大鼠妊娠期铁缺乏对新生仔鼠生长激素-胰岛素样生长因子-1(GH-IGF-1)轴的影响及机制。方法 4周龄雌性Wistar大鼠36只,随机分为实验组和对照组,分别饲低铁饲料和含铁饲料喂养4周,检测雌鼠血红蛋白(Hb)浓度,血细胞比容(HCT)、红细胞平均容积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)及红细胞分布宽度(RDW)等血液学相关参数。将雌鼠与正常雄鼠合笼,孕末期检测血液学相关参数并行骨髓铁染色。观察仔鼠存活率及体重。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)方法检测新生仔鼠垂体生长激素(GH)及肝脏胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达量。结果相比对照组,实验组低铁干预4周后孕鼠孕末期Hb、HCT、MCV、MCH及MCHC等水平降低(P<0.05),RDW水平升高(P<0.05);实验组大鼠骨髓细胞内铁及外铁减少;实验组新生仔鼠体重及仔鼠存活率低于对照组(P<0.05);实验组垂体GH信使核糖核酸(mRNA)及肝脏IGF-1 mRNA的表达低于对照组(P<0.05)。结论妊娠期铁缺乏下调子代GH和IGF-1 mRNA表达造成子代低出生体重。; 桑璐马雅静周祖钊王维林霖邱智枫; 关键词：铁缺乏生长激素胰岛素样生长因子-1

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王维

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